免疫增强治疗

2024-06-10 版权声明 我要投稿

免疫增强治疗(推荐9篇)

免疫增强治疗 篇1

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择兰州大学第二医院2014年1月—2015年3月来本院就诊的患儿165例, 其中, 男86例, 女79例, 年龄11个月~6.8岁, 平均年龄3.2±1.7岁, 病程11.4±5.6个月。均符合反复呼吸道感染标准。患儿随机分为三组, 丙种球蛋白组55例, 转移因子组55例均为治疗组, 对照组55例为常规的抗病毒感染;三组病例在性别、年龄、发病情况上差异无显著意义 (P﹥0.05) , 具有可比性。

1.2 治疗方法

对照组患者常规抗病毒感染、对症治疗。治疗组除常规抗病毒感染对症治疗外, 给予免疫增强剂丙种球蛋白 (同路生物制药有限公司生产, 批准文号:国药准字S20063139) 静脉滴注, 200~300mg/ (kg.次) , 每周一次, 共用5次[2]。转移因子组患儿在常规抗病毒感染、对症治疗的基础上, 加用转移因子治疗, 转移因子注射液每两周1次, 1次1支皮下注射, 共7次为一个疗程。观察呼吸道感染的次数及时间。

1.3 疗效判断标准

全愈:治疗后没有一次呼吸道感染;有效:治疗后2次以下呼吸道感染;好转:病情减轻;无效:病情无改善。

1.4 统计学方法

数据使用SPSS17.0软件数据分析, 治疗前后观察各指标, 计量数据以平均值 (±s) 标准差进行表示, 采用t检验, P<0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 治疗后三组患儿的疗效情况 (见表1)

治疗后丙种球蛋白组与转移因子组与对照组比较, 有非常显著的差异 (P<0.01) , 在抗病毒感染的基础上, 使用丙种球蛋白和转移因子治疗儿童反复呼吸道感染, 其疗效优于单纯抗病毒感染治疗。

2.2 治疗前后三组患儿的呼吸道感染情况 (见表2)

由上表可知, 对照组反复感染持续时间较治疗前缩短 (P﹤0.05) , 而感染次数没有减少;丙种球蛋白组和转移因子组感染次数较治疗前明显减少, 感染持续时间较治疗前缩短非常显著。治疗后患儿的呼吸道感染次数治疗组与对照组相比较, 差异有统计学意义 (P﹤0.05) ;感染持续时间也明显短于对照组 (P<0.01) 。

3 讨论

小儿反复呼吸道感染的发病机理尚不确切, 已有的研究表明, 约25%的RRTI患儿与免疫功能低下有关, 尤其是与细胞免疫功能低下相关[3]。免疫增强剂主要是调整机体的免疫状态, 使低下的免疫功能趋于正常。其主要作用促进T淋巴细胞增殖分化, 改变T细胞亚群的比例[4];促进白细胞介素-2的产生, 并进而影响免疫活性细胞的增殖、分化功能。因为机体不能有效地杀灭呼吸道的病毒、细菌等病原微生物, 病原微生物的感染进一步抑制了机体免疫功能, 使得患儿呼吸道感染反复发作[5]。因此, 我们认为在治疗反复呼吸道感染患儿时, 一方面要给予抗感染治疗, 另一方面要应用免疫增强剂, 调节患儿的免疫功能, 提高机体免疫力。

转移因子为细胞免疫反应中的主要因子, 能促进T细胞成熟, 双向调节机体免疫功能, 且无抗原反应。转移因子可通过促进免疫球蛋白的产生和干扰素的释放等, 同时发挥增强特异性和非特异性免疫反应的作用[6]。改善细胞免疫功能紊乱, 提高血Ig G及Ig A水平, 减少临床发病次数, 无明显不良反应。

静脉注射丙种球蛋白可每月用200~300ng/kg, 替补治疗原发性低丙种球蛋白血症或免疫缺陷病。因为, 丙种球蛋白含有丰富Ig G型抗体, 能被动提供特异性抗体, 中和病原菌及毒素, 调理白细胞吞噬功能。严重感染患儿用其治疗后, 体液、细胞免疫功能明显增强, 补充了多种抗体, 防治了感染, 减少RRTI的发生, 但价格昂贵。

总之, 通过对三组患儿的资料对比显示, RRTI在抗病毒感染、对症治疗的基础上, 使用免疫增强剂丙种球蛋白或转移因子, 患儿呼吸道感染的次数明显减少, 每次持续时间也明显缩短, 其疗效优于单纯的抗病毒, 且不良反应小, 疗效肯定。因此, 要确定RRTI患儿是否存在免疫力低下需常规进行免疫学过筛试验, 并排除过敏性哮喘和慢性扁桃体炎, 结合实验室结果和临床表现, 选择合理的免疫增强剂联合抗病毒来治疗RRTI有着广阔的应用前景, 值得进一步推广应用。

参考文献

[1]崔永镇.三种免疫增强剂的研究进展[J].畜牧兽医科技信息, 2012 (2) :22-23.

[2]杨丽君.免疫增强剂治疗小儿反复呼吸道感染的价值[J].药物与临床杂志, 2008, 5 (9) :31-32.

[3]段若竹.免疫增强剂的研究应用及展望[J].国外医学抗生素分册, 2006, 27 (2) :54-57.

[4]唐荣玲.静脉注射丙种球蛋白治疗反复呼吸道感染疗效观察[J].华夏医学, 2006, 19 (2) :273.

[5]Karcher J, Dyckhoff G.Antitumor Vaccination in patient with head and neck squamous cell carcinomas with autol ogous Virus-modified tumor cells[J].Cancer Res.2004, 64 (21) :8057.

免疫增强治疗 篇2

有一位朋友和我说了这个一件事情,就是他自己的儿子在上幼儿园前生病的次数是非常的少的。但是之后开始上幼儿园了,基本上月月生病,之后他和自己的护士老婆没事就在一起讨论这到底是为什么,最后得出了一个结论就是,幼儿园里面的孩子多,所以可以传染的疾病和人也多。

怎样提高孩子免疫力呢?任献青认为首先不能让孩子有食积,少让他吃肉,多吃蔬菜水果,同时改掉睡前喝奶的习惯。

他观察儿子的过程中发现,孩子睡前喝奶容易造成大便干,舌苔厚腻,消化不好,食积发烧,这可能与入睡后胃肠蠕动减慢、牛奶在胃内凝集成块、不好消化有关。改掉这一习惯后,儿子的食积发烧症状改善了不少。

牛奶可以让孩子在去幼儿园前,即早上喝。如果早上没喝晚上喝,最好放在睡前一两个小时。

经常吃点保和丸

孩子“没有内热,不得外感”。只要孩子大便通畅,消化功能好,能吃能拉,免疫力就会增强,得病的机会就少。他说儿子从去年春节到现在一共病过两次,都是感冒,用点中药烧就退了。这主要归功于他给孩子吃了一段时间的保和丸。

保和丸里面有神曲、山楂、茯苓、连翘、陈皮、莱菔子(萝卜子)等,是一种很便宜的消食导滞药,还有清热作用,适合饮食过度或消化功能不好造成的厌食、便秘等。任献青给孩

子使用的方法是,便秘明显时连续吃一段时间,不明显时偶尔吃。这样调理半年下来,孩子大便通畅,胃口好了,体质明显增强。

他用这个方法观察了很多患儿,效果都不错。

对于很多家长喜欢用的王氏保赤丸、肥儿丸,任献青说,王氏保赤丸作用弱些,适合3岁以下孩子。虽然这两种药都有通大便、泄热作用,但不能长期服用,只能用于孩子两三天没大便时。吃药就拉稀便,不吃不拉,会形成依赖性,不能从根本上改善便秘问题。

发烧少用抗生素

任献青说,感冒发烧80%~90%都是病毒感染,不需用抗生素,而且用了也没用。他见过很多孩子,越输抗生素,免疫力越低下,感冒一场接一场,还容易合并细菌感染。

他的儿子长这么大,只输过两次抗生素,就是刚上幼儿园的那一年。平时孩子感冒发烧时,第一天给他口服“消积散”等中药散剂后,第二天就变成白天不烧夜里烧。继续服用,到第三或第四天退烧,一点抗生素没用,连咳嗽问题都解决了。

他说,只要不是超过两天发高烧,到医院查血象正常,对孩子发烧不必恐惧,也不必急于退烧。当然,对于经常感冒、免疫力特别低下的孩子,可以在医生指导下用些调节免疫的药,如“转移因子口服液”“胸腺肽”等。

增加户外活动量

任献青认为,现在孩子缺乏的是阳光和空气,所以带孩子玩耍一定要到户外,散步、跑步都行。没有时间的家长,可以给孩子报个游泳班、跆拳道班,小女孩可上个舞蹈班。综合上述调理方法,相信孩子体质会有一个质的飞跃。

温馨提示

缺锌也会引起免疫力低下导致容易生病的情况,补锌要用锌硒宝

补锌产品发展史

第一代无机锌

硫酸锌、氯化锌、硝酸锌等(锌吸收利用率仅7%,有强烈的肠胃刺激副作用,已淘汰。)

第二代有机锌

葡萄糖酸锌、甘草锌、醋酸锌、柠檬酸锌、氨基酸锌、乳酸锌(锌吸收利用率14%,只能饭后服用,有些副作用),婴儿及孕妇不建议用。

第三代蛋白锌(又称生物锌)

代表是新稀宝牌锌硒宝片(锌吸收利用率高达95%以上,对肠胃没有刺激,吸收效果好),是目前补锌技术中最理想和最好的。

应该有不少的朋友都吃过地方,一般来说,地瓜都会被当作炒菜来配着肉丝等菜一起下锅炒,其实这样的方法也是很不错的,炒出来的地瓜味道也不错。但是宝宝们不一定爱吃,但是小编为大家推荐这款地瓜奶酪黑芝麻球就不一样了,因为它不但看上去好看,而且吃起来味道也是非常的适合孩子们。

地瓜奶酪黑芝麻球

地瓜含有大量柔软的膳食纤维,可以促进排毒,还能预防癌症。最重要的是很通便呢,朋友给的几个地瓜,老公又不爱吃,所以就变着花样做着吃了,里面加了儿童奶酪,还加了宝宝最爱吃的葡萄干,所以宝宝拿着当点心一样喜欢呢。

所需食材/厨具

主料

地瓜(100克)

调料

葡萄干(50克)

黑芝麻(适量)

儿童奶酪(适量)

厨具

蒸锅

制作步骤

地瓜去皮切块后放锅中蒸熟。

蒸熟的地瓜晾凉后放入保鲜袋,里面再加入一块奶酪。

用擀面杖把奶酪和地瓜擀成泥。

地瓜奶酪泥倒入碗中。

葡萄干用温水浸泡一会后沥干水分。

拿一块地瓜奶酪泥,然后在里面放入几粒葡萄干。

用手团成圆球状。

放入装黑芝麻的碗中晃动一圈,让它沾满黑芝麻即可。

小窍门

地瓜和葡萄干都有甜度的,所以不用放糖了。

葡萄干比较硬,所以在温水中浸泡一会哦。可以蒸地瓜的时候就泡上。

土豆的味道大家应该都是知道的,平时我们吃的薯条就是土豆炸出来的,这样的吃法虽然美味,但是非常的不健康。为了保证吃下去的土豆有非常好的营养,而且有能够保持土豆原有的味道,小编为大家推荐了宝宝们都喜欢吃的一款食物,那么就是超级烤土豆。

超级烤土豆

所需食材/厨具

主料

土豆(2个)

鸡蛋(2个)

调料

香菇(少许)

洋葱(少许)

培根肉(少许)

小葱(少许)

盐(适量)

黑胡椒(适量)

厨具

电烤箱

制作步骤

土豆洗净,不要去皮。上锅蒸熟

在土豆1/3处切下

用勺子将土豆挖出一个椭圆形的孔,四周不要挖的太薄

将洋葱、培根肉、香菇、切碎

将洋葱、培根肉、香菇碎放入挖好的土豆中

撒少许食盐,打入一个鸡蛋覆盖在土豆表面,鸡蛋表面撒少许食盐和黑胡椒

烤箱170度 中层 40分钟,烤好后,可在表面撒少许葱碎

小窍门

增强免疫力“菜单” 篇3

◆海洋食品

海参:全世界有1100多种海参,我国海域有100多种,可供食用的约占一半以上。海参既是美味食物,又是滋补良药,在明代以后被收载入补益药类。海参性味甘温,有补肾益精、养血润燥的功效。国内外对海参进行了大量研究,证明它有多方面药理功能,如抗肿瘤、增强细胞吞噬能力,影响实验小鼠的免疫功能。

鱼鳔:指石首鱼、鲟鱼、鳇鱼的鱼鳔。鱼鳔性味甘平,有补肾养精、滋阴补血的功效。鱼鳔主要用于癌症的辅助滋养调理,可加入适量的人参和肉类同煮。

乌龟:本品性甘味咸平,有滋阴养血功效。用乌龟加沙参、冬虫夏草、瘦猪肉熬汤,调味服食,既是美味菜肴,又有补血养阴、大补虚损功能。

◆乳品

牛奶:牛奶性味甘平,有补虚损、益脾胃、生津液的功效。牛奶的蛋白质中含有人类所需的全部氨基酸。

羊奶:性味甘温,有补虚养血的功效,山羊奶的脂肪及蛋白质比牛奶高,绵羊奶更高。

◆食用真菌

食用真菌营养丰富,味道鲜美,也能不同程度地提高免疫功能,促进白细胞、单核巨噬细胞数量增加,增强吞噬功能,促进淋巴母细胞转化,促进抗体生成等,调动机体抗癌能力,对预防和治疗肿瘤均有积极作用。

猴头菇:味甘平,有扶正补虚、健脾养胃的功效。用猴头菇配合肉类煮食,既是贲门癌、肠癌等消化道肿瘤的抗癌药物,亦是美味佳肴。

香菇:味甘香,有养胃益气功效。香菇中有一种香菇多糖成分能增强机体的细胞和体液免疫功能。有人用香菇多糖片,治疗那些不能胜任化疗药物的晚期肺癌患者,服药2~3月后,症状缓解、精神好转、食欲增加。香菇亦可配合鱼、肉类煮食、达到扶正补气的作用。

银耳:性味甘淡、平,有润肺养胃、滋阴生津的功效,是一种理想清润滋补品。

◆新鲜水果

水果和蔬菜提供人类必需的各种营养素。自然界中的天然抗癌物质,也广泛存在于新鲜水果和蔬菜中,这些食物富含维生素A、B、C、D、E以及微量元素、多糖类和食用纤维。新鲜蔬菜供给机体一定量的粗纤维,以保持大便的通畅,对防止肠癌有积极意义。

免疫增强治疗 篇4

1 材料

1.1 主要试剂及仪器设备

党参、淫羊藿、当归、枸杞、何首乌、陈皮等中药均购于保定安国药市;环磷酰胺 (CTX) 批号为0901311, 山西泰盛制药有限公司生产;IL-2和TNF-α进口分装ELISA试剂盒为晶美生物公司产品;IgG标准品, 批号为110624, 北京博奥森生物技术有限公司生产;左旋咪唑, 批号为070105, 常州动物保健品有限公司生产;紫外可见分光光度计购于北京普析通用仪器有限责任公司。

1.2 试验动物

清洁级纯昆明种小鼠, 雌雄兼用 (18±2) g, 由河北北方学院实验动物中心提供。

1.3 中药水煎液的制备

党参20 g、淫羊藿16 g、当归10 g、枸杞8 g、何首乌10 g、桔皮10 g、升麻10 g、柴胡10 g, 自来水浸泡2 h, 先后加自来水800 m L和400 m L分别煮沸1 h和30 min, 合并两次药液, 纱布过滤, 水浴蒸发至100 m L得归参汤水煎剂 (约含生药1 g/m L) 。

2 方法

2.1 归参汤对小鼠免疫器官重量的影响

采用重量法。取小鼠50只, 随机分成5组, 分组情况见表1, 给药剂量:生理盐水、归参汤、左旋咪唑灌胃剂量分别为每10 g体重0.2 m L、每千克体重44 g、每千克体重0.1 g, 环磷酰胺组于第1天、第3天、第5天皮下注射环磷酰胺, 每千克体重0.03 g, 连续给药7 d, 末次给药1 h后脱臼处死, 取脾脏并称其湿重计算脾脏指数, 结果见表1。

注:**表示与生理盐水组比较差异极显著 (P<0.01) , *表示与生理盐水组比较差异显著 (P<0.05) ;△△表示与环磷酰胺组比较差异极显著 (P<0.01) , △表示与环磷酰胺组比较差异显著 (P<0.05) 。

2.2 归参汤对小鼠血清IgM含量的影响

取小鼠40只, 按表2分组并给药。每日给药1次, 连续7 d, 于试验第2天给药后用20%的绵羊红细胞 (SRBC) 免疫小鼠, 腹腔注射0.2 m L/只, 环磷酰胺组于第1天、第3天、第5天皮下注射环磷酰胺, 按每千克体重0.03 g。末次给药后1 h眼静脉丛采血制备血清, 离心后取上清液在540 nm处测定OD值, 再计算IgM含量, 结果见表2。

2.3 归参汤对小鼠血清IgG含量的影响

采用双抗夹心ELISA法。动物分组见表2, 给药及免疫方法与重量法相同, 于末次给药后1 h眼眶取血制备血清, 采用双抗夹心ELISA法检测IgG含量。结果见表2。

注:**表示与生理盐水组比较差异极显著 (P<0.01) , *表示与生理盐水组比较差异显著 (P<0.05) ;△△表示与环磷酰胺组比较差异极显著 (P<0.01) , △表示与环磷酰胺组比较差异显著 (P<0.05) 。

2.4 归参汤对小鼠血清中IL-2和TNF-α的影响

采用双抗夹心ELISA法。取昆明种小鼠40只, 随机分为4组, 动物分组及给药见表3。除生理盐水组外, 其他各组小鼠在给药后第8, 10, 12天于皮下注射环磷酰胺, 按每千克体重0.03 g, 制作免疫抑制模型。给药后第15天, 所有小鼠腹腔注射水合氯醛麻醉后, 眼静脉丛取血, 分离小鼠血清, 按试剂盒说明书操作, 用ELISA方法测定IL-2和TNF-α的含量, 结果见表3。

注:**表示与生理盐水组比较差异极显著 (P<0.01) , *表示与生理盐水组比较差异显著 (P<0.05) ;△△表示与环磷酰胺组比较差异极显著 (P<0.01) , △表示与环磷酰胺组比较差异显著 (P<0.05) 。

3 统计学处理

采用SPSS 17.0统计分析软件进行数据处理, 计量资料以均数±标准差 (X±S) 表示, 组间比较采用方差分析, P<0.05为有统计学意义。

4 结果

4.1 归参汤对小鼠免疫器官重量的影响

由表1可以看出, 中药组与生理盐水组试验末体质量相比差异显著, 说明中药组对小鼠有一定的促生长作用, 注射环磷酰胺组的小鼠试验末体质量出现负增长 (-0.08%) , 而注射环磷酰胺+归参汤组增重率是2.33%, 脾脏指数与环磷酰胺组相比差异极显著 (P<0.01) , 说明归参汤能颉颃由环磷酰胺所导致的体重下降, 但效果不及阳性对照组。

4.2 归参汤对小鼠血清IgG、IgM含量的影响

由表2可见, IgG和IgM含量测定中, 归参汤组与生理盐水组相比差异极显著 (P<0.01) , 环磷酰胺+归参汤组与环磷酰胺组相比差异极显著 (P<0.01) 。

4.3 归参汤对小鼠血清中IL-2和TNF-α含量的影响

由表3可见, 环磷酰胺组与生理盐水组相比, IL-2和TNF-α均显著下降, 归参汤组和左旋咪唑组与环磷酰胺组比较均能显著提高IL-2和TNF-α的含量。

5 讨论

试验较全面地从免疫器官重量、特异性免疫和非特性免疫等方面对归参汤进行了研究。结果显示, 归参汤对正常小鼠脾脏指数没有显著影响, 而对环磷酰胺所致的免疫抑制小鼠的脾脏指数有一定程度的促恢复作用, 能在一定程度上颉颃环磷酰胺造成的小鼠体重下降、脾脏增生等毒副作用。

淋巴细胞是机体免疫细胞的重要成员, 是构成免疫器官的基本单位, 在免疫应答过程中起着核心作用。B淋巴细胞是体内唯一能产生抗体免疫球蛋白分子的细胞。成熟的B淋巴细胞可分泌抗体, 发挥体液免疫功能, 因此, 体内IgG和IgM水平可反映机体的体液免疫功能。成熟的B淋巴细胞可以分泌特异性的抗体来中和抗原, 发挥体液免疫功能。试验结果显示, 归参汤能显著提高正常小鼠和免疫抑制小鼠体内的IgG和IgM水平, 从而发挥体液免疫功能。

菜籽多肽增强免疫力作用的研究 篇5

1 材料与方法

1.1样品

菜籽多肽硬胶囊由江苏某油脂公司提供,胶囊内容物为淡黄色粉末(相对分子质量<5 000),人体每日推荐摄入量1 320 mg。

1.2实验动物

健康雌性清洁级ICR小鼠200只[动物生产许可证号:SCXR(沪)2012—0002号],体重18.0~22.0 g,购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。动物饲养在SPF级动物房[实验动物环境设施合格证号:SYXK(苏)2012—0037],均给予灭菌鼠饲料和灭菌水自由摄食饮水。

1.3剂量设计

将成人每日推荐摄入量1 320 mg按60 kg体重计,即22 mg·(kg BW)-1·d-1。实验设高、中、低3个剂量组,即660、220和110 mg·(kg BW)-1·d-1(分别相当于人体推荐量的30、10和5倍),同时设溶剂对照组。称取样品1 100、2 200、6 600 mg,分别加纯净水至200 ml配制成各组受试液(每2 d配制1次并储于4℃冰箱),采用经口灌胃法,按20 ml·(kg BW)-1灌胃容量给小鼠灌喂,溶剂对照组灌喂纯净水,持续灌喂30 d后测免疫指标[6]。

1.4实验方法

将200只小鼠分为5批,再按体重随机分成4组,每组10只,5批分别进行二硝基氟苯(DNFB)诱导小鼠迟发型变态反应(DTH)实验、刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)和NK细胞活性测定、抗体生成细胞检测(琼脂糖平板法)和血清溶血素测定(半数溶血值测定法)、小鼠碳廓清实验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(滴片法)[7]。参照2003版卫生部《保健食品检验与评价技术规范》,分别测定小鼠免疫器官指数、耳廓肿胀度、光密度差值、溶血空斑数、血清半数溶血值(HC50)、吞噬指数及NK细胞活性。

1.5实验数据统计

应用SPSS统计软件对各项指标原始数据进行正态性检验与方差齐性检验,用单因素方差分析(oneway ANOVA)对满足“方差齐”和“正态分布”的数据统计处理,用Dunnett-t检验的两两比较法对P<0.05的数据统计处理;对不满足“方差齐”或“正态分布”要求的数据作变量转换并用转换后满足要求的数据进行统计;如果变量转换后数据依然不能满足要求,则改用秩和检验统计[6,7]。

2 结果

2.1 菜籽多肽对动物体重和脏器/体重之值的影响

实验前后各剂量组小鼠体重及增重与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),实验终末各剂量组小鼠的免疫器官指数(胸腺/体值、脾/体值)与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),说明菜籽多肽对小鼠体重及免疫器官/体重值无显著影响。

2.2 细胞免疫功能实验(二硝基氟苯诱导的小鼠迟发型变态反应)

菜籽多肽低、中、高剂量组小鼠耳廓肿胀度分别为(23.41±4.98)、(19.57±3.63)和(19.68±5.61) mg,均较溶剂对照组的(14.84±5.88) mg高,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。

2.3 细胞免疫功能实验(ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验)

如表1所示,菜籽多肽低、中、高剂量组的光密度差值均显著高于溶剂对照组(P<0.01或P<0.05)。

2.4 体液免疫功能实验(抗体生成细胞检测)

菜籽多肽低、中、高剂量组小鼠溶血空斑数分别为498.7±152.3、476.3±157.4和496.9±131.2,与溶剂对照组的423.9±97.8相比略有增高,但差异均无统计学意义(P>0.05)。

2.5 体液免疫功能实验(血清溶血素实验)

菜籽多肽低、中、高剂量组小鼠血清半数溶血值(HC50)分别为167.91±1.89、168.02±1.26和166.96±2.09,与溶剂对照组的165.63±6.06相比均略有增高,但经秩和检验,差异无统计学意义(P>0.05)。

2.6 单核-巨噬细胞功能实验(小鼠碳廓清实验)

菜籽多肽低、中、高剂量组小鼠的吞噬指数a与溶剂对照组比较均增高,其中低、中剂量组与对照组的差异有统计学意义(P<0.01、P<0.05),见表2。

2.7 单核-巨噬细胞功能实验(小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验)

菜籽多肽低、中、高剂量组的巨噬细胞吞噬百分率分别为(14.5±2.7)%、(15.4±2.7)%、(15.8±2.4)%,吞噬指数分别为0.185±0.040、0.207±0.044和0.204±0.044,与溶剂对照组的(14.0±3.0)%及0.184±0.032相比均有增高,但吞噬率差异均无统计学意义(P>0.05)。

2.8 NK细胞活性测定

与溶剂对照组NK细胞活性的(40.2±5.5)%相比,菜籽多肽低剂量组小鼠的NK细胞活性[(51.7±13.1)%]显著增高,中剂量组[(38.5±9.7)%]略微降低,高剂量组[(41.2±9.9)%]略微增高,经方差分析及两两比较,仅低剂量组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。

3 讨论

3.1 菜籽多肽对小鼠细胞免疫功能的影响

两项细胞免疫功能实验均为阳性,表明菜籽多肽对小鼠的DTH反应及小鼠脾淋巴细胞的增殖均有促进作用,因而证明菜籽多肽在增强小鼠细胞免疫方面有一定作用。薛照辉等[8]在研究中应用DTH反应验证了其实验中高剂量组菜籽多肽可显著提高荷瘤小鼠特异性细胞免疫功能,中、低剂量组也对小鼠DTH反应强度有促进表现但并未显示出差异有统计学意义,这应该是由于其实验的中、低剂量组的剂量仅为50、100 mg·(kg BW)-1·d-1,均低于我们实验中低剂量组的剂量,而高剂量组高于我们的低剂量组剂量所致。由此可以推测对小鼠DTH反应产生有统计学意义促进作用的剂量临界值可能在100~110 mg·(kg BW)-1·d-1之间。但同时薛照辉等[8]也发现,菜籽多肽能够显著提升荷瘤小鼠的免疫器官重量,且其剂量浓度与胸腺指数、脾指数均呈正相关,这与本实验后小鼠免疫器官无明显增重的结果不一致,原因可能是肿瘤会刺激免疫器官作出免疫应答,使得胸腺或脾脏增生,而在本实验中所采用的小鼠为非荷瘤小鼠,导致了结果的差异。在其他多肽类的研究中,油茶粕多肽[9]也对促进小鼠免疫脏器生长有积极影响,且有一定的剂量-效应关系,这与本研究的结果有较大差异,可能原因是一方面与多肽的类别有关,另一方面在油茶粕多肽研究中选用的剂量更高,因此仍需进一步研究验证。

3.2 菜籽多肽对小鼠体液免疫功能的影响

两项体液免疫功能实验均显阴性,说明菜籽多肽未体现提高小鼠抗体生成细胞数的能力,也未能明显提高溶血素,提示菜籽多肽对小鼠体液免疫无促进作用。但若直观地观察实验数据可以发现,菜籽多肽低、中、高3个剂量组的脾抗体生成细胞量和血清溶血素较之对照组均有一些上升,据此可以推测菜籽多肽可能对小鼠体液免疫功能有较弱的促进作用,对此现象和相关的猜想仍需进一步探究验证。在其他多肽的研究中,大豆小分子多肽[10]的两项体液免疫功能实验均为阳性,油茶粕多肽[9]被证实可显著提高HC50,玉米黄浆多肽[11]可明显提升血清抗体水平,都体现出对小鼠体液免疫的显著增效,这与本研究对菜籽多肽的研究结果也存在一定的差异,原因可能是不同来源的多肽,其氨基酸组成各异,多肽肽链也不同,导致功能上存在差异,对体液免疫功能影响程度也各不相同。

3.3 菜籽多肽对小鼠腹腔单核-巨噬细胞功能和NK细胞活性的影响

巨噬细胞吞噬实验显阴性,但小鼠碳廓清实验的低、中剂量组显阳性,提示菜籽多肽对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能有增强作用。薛照辉等[8]的研究也得出了同样的结论,但不同点在于其实验结果中150mg·(kg BW)-1·d-1剂量的菜籽多肽即可显著提高巨噬细胞吞噬率,而在我们的实验中660与220 mg·(kg BW)-1·d-1的中、高剂量组菜籽多肽均未显著提高吞噬率,可能是因为薛照辉等的实验中所用的荷瘤小鼠的肿瘤刺激了吞噬细胞的反应。

NK细胞活性测定的低剂量组实验结果表明菜籽多肽能增强NK细胞的吞噬活性,但实验数据并未显示出剂量-效应关系,中剂量组的NK细胞活性甚至低于对照组,可能是因为菜籽多肽剂量若超过一定值后反而会抑制NK细胞活性。在一个对大马哈鱼多肽的研究[12]中也发现了多肽剂量较低时NK细胞杀伤活性被明显增强,而大量增加多肽剂量反而会降低NK细胞活性,研究人员推测是多肽对免疫调节有双相作用。在花生多肽[13]和大豆小分子多肽[14]的研究中也进行了NK细胞活性检测,其中前者能显著增强NK细胞活性并呈现剂量-效应关系,而后者则对NK细胞活性影响不大,原因可能是不同种多肽之间存在性质和功能的差异,对剂量的要求也各不相同。

三种免疫增强剂的研究进展 篇6

1 抗力优FIRSTTMImmune (胞壁酰二肽及其免疫复合物)

N-乙酰胞壁酰-D-丙氨酰-D-异谷氨酰胺。一种合成的水溶性肽聚糖衍生物。为细菌肽聚糖结构的一部分, 常用做免疫佐剂。

1.1 研究进展

胞壁酰二肽 (muramy L dipeptide, MDP) 是1974年EL-Louz等从分枝杆菌细胞壁中分离得到的具有活性的最小结构片段, 是分枝杆菌的主要免疫活性成分之一, 其成分为N-乙酸胞壁酸-L-丙氨酸-D-异谷氨酰胺。它是弗氏全佐剂 ( (FCA) 的活性部分, 单纯注射胞壁酰二肽即可增强机体非特异性的免疫功能, 与抗原合用则可增强机体对多种抗原的免疫功能。其免疫复合物为分支杆菌菌体破碎后提取获得的含有多种免疫增强组分 (如核酸、多糖、二肽) 的具有免疫增效功能的复合物, 具有免疫活性广、毒性低、无抗原性和内毒素, 肌注、口服等多种途径给药等特点。

1.2 作用机理

以往研究表明, 胞壁酰二肽及其免疫复合物与疫苗合用, 具有如下作用: (1) 能刺激吞噬细胞对抗原的处理, 表现为活化巨噬细胞, 在注射部位形成肉芽肿, 吸引吞噬细胞, 诱导机体产生细胞因子, 进一步增强吞噬细胞盒淋巴细胞活性, 使其更易捕获抗原; (2) 促进淋巴细胞之间的接触, 增强辅助T细胞的作用; (3) 刺激致敏淋巴细胞的分裂和浆细胞产生抗体; (4) 提高机体初次和再次免疫应答的抗体滴度; (5) 改变抗体的产生类型以及产生迟发型变态反应, 并使其增强。

1.3 评估

胞壁酰二肽虽然分子量很小, 但有很强的佐剂活性, 能增强体液和细胞免疫, 提高疫苗、菌苗、病毒亚单位及寄生虫苗的保护力, 其优点是注射局部反应轻微, 极少发生局部化脓等不良反应;无抗原性和过敏原性, 反复注射, 不产生抗体也不产生过敏反应;无致癌作用;分子量小, 对生物学降解作用有抵抗力, 可以口服。胞壁酰二肽的主要作用是活化巨噬细胞, 在注射部位形成肉芽肿, 吸引吞噬细胞, 诱导机体产生细胞因子, 进一步增强吞噬细胞和淋巴细胞活性, 使其更易捕获抗原。

胞壁酰二肽曾被认为是最有发展前途的佐剂之一。但胞壁酰二肽存在致热原性 (pyrogenicity) , 在动物体内会引起赖特尔过敏综合征, 为了降低胞壁酰二肽的毒副作用, 近几年对其分子进行系统化学改造的研究十分活跃, 已报道的化学合成胞壁酰二肽衍生物或类似物己超过600种, 其中最有效的是胞壁酰二肽亲脂性衍生物。研究表明, 在水溶性胞壁酰二肽分子中引进各种长链脂肪酸及其它亲脂性基团, 增加了该分子的亲脂性, 而亲脂性在一定程度上与免疫佐剂的免疫增强效应呈正相关关系。

2 多聚-肽核酸 (Cp G-PNA)

Cp G-PNA是指人工合成的反义寡核苷酸序列与鸟嘌呤核苷酸 (Cp G) 为基元结合后经肽骨架修饰的多聚体核酸。能激活多种免疫效应细胞, 又被称为免疫核酸。

2.1 研究进展

肽核酸 (Peptide Nucleic Acids, PNAs) , 是20世纪90年代初发现的新型DNA/RNA同类物, 是一类人工合成的用蛋白质骨架代替核酸中的磷酸核糖骨架而形成的新型分子, 由于它拥有诸多DNA/RNA不具备的优点, 因此具有非常广泛的分子生物学效应, 尤其在疾病的诊断和基因治疗方面有着广泛的应用前景。

2.2 作用机理

Cp G-PNA可结合于TLR9, 刺激B细胞分化, 分泌IL-2、IL-6和IL-12, 促进MHCII类和B7分子的表达, 诱导单核细胞及吞噬细胞活化并分泌细胞因子和趋化性细胞椅子, 更多地诱导Th1反应。Cp G-PNA与蛋白质 (抗原) 结合或与传递系统一起可发挥出的功能性免疫增强佐剂效果。

2.3 评估

具有结构稳定、不被核酸酶和蛋白酶降解、能以碱基互补方式与核酸单链结合、细胞毒性低等特点。

3 ISCOM2000:抗原稳定剂 (Immunostimulating Com-plexes)

ISCOM2000是一种全新的抗原提呈系统, 1984年由Morein首次报道, 有免疫增强作用, 具有佐剂和抗原提呈的双重功能。

3.1 研究进展

目前已有许多亚单位疫苗和遗传工程疫苗采用了IS-COM2000, 针对相应的疾病防治, 取得了良好的效果, 如口蹄疫病毒、流感病毒的血凝素和神经氨酸酶、狂犬病毒糖蛋白以及沙门氏菌的外膜蛋白等。ISCOM2000是以皂昔Quil A为基础, 通过表面疏水作用与两性抗原分子和脂质分子交联而成的颗粒, 直径为35nm, 成笼状结构。

3.2 作用机理

笼状结构即固化了抗原分子, 同时也较好的模拟了体内识别抗原的微环境, 使得可溶性抗原变为颗粒性抗原, 加强了抗原的粘附性和集体的吞噬作用。在体液环境中有利于和APC膜相互作用, 诱导Th克隆增殖和细胞毒性T淋巴细胞 (CTL) 应答。ISCOM2000对细胞和体液免疫都有增强作用。它能引起抗体应答, 且速度快, 持续时间长, 抗体水平高, 能显著增强T细胞增殖、分化, 诱导特异性抗体Ig G, Ig G2a, Ig G2b及Ig G3亚型产生, 增强CTL活性, 提高MHC-I分子在APC的表达, 诱导IL-1, IL-2及IFN-y产生, 并具有粘膜免疫活性。

3.3 评估

ISCOM具有产生“全面”免疫应答的效力。在临床前期实验中ISCOM与CMV, HIV, EBV和流感病毒重组蛋白抗原一起诱导CTL反应, 其效果良好。

4 展望

增强免疫比浊法试剂测定血清铁蛋白 篇7

1.1 原理

样品中铁蛋白与试剂中相应的抗体在溶液中相遇, 立即形成抗原—抗体复合物, 并形成一定浊度, 在一定量抗体存在时浊度的高低与抗原的含量成正比。通过与同样处理的校准液比较, 计算未知样品中的铁蛋白含量。

1.2 试剂

铁蛋白检测试剂、标准品、质控品由浙江伊利康生物技术有限公司提供。

1.3 仪器

采用FH400全自动生化分析仪。

1.4 方法

将80μg/L校准品按倍比稀释为40, 20, 10, 5及0μg/L作6点定标。基本测定参数:主波长600nm, 副波长800 nm, 试剂1 (R1) 240μL, 试剂2 (R2) 60μL。加入R1试剂5min后加入R2试剂, 反应时间5min。

2 实验结果

2.1 精密度评价[1]

按NCCLS评价方案, 取低、中、高3个不同浓度的血清样本, 铁蛋白浓度分别为55μg/L 、174μg/L、435μg/L , 连续测定20次, 再每天测1次, 共测20d, 结果见表1。

2.2 线性范围评价[2]

按NCCLS的评价方案, 用铁蛋白浓度为600μg/L和40μg/L的高低值样本2份, 等量混合产生中间值320μg/L, 中间值再与高、低值等量混合, 产生460μg/L和180μg/L的5个梯度值铁蛋白样本, 在仪器上以低值到高值和高值到低值分别测定, 求得两次平均值, 以X作为理论值, Y作为测定值进行回归分析, 其方程Y=0.9857X+1.1714, R2=0.9996。表明铁蛋白浓度在180μg/L~600μg/L范围内, 线性良好。

2.3 比对实验

取铁蛋白浓度从30μg/L~500μg/L的新鲜血清标本50份, 分别用本试剂与进口试剂同时测定铁蛋白浓度, 所得数据均按NCCLS文件统计, 经t检验得P>0.05, R2 =0.9996, 表明本试剂与进口试剂高度相关。

2.4 回收实验

取低值和高值新鲜血清各1份 (60 μg/L、530 μg/L) , 以不同比例混合, 结果显示本法测定血清铁蛋白的平均回收率为99% 。见表2。

2.5 干扰试验

取4份高值铁蛋白混合血清, 分别加入干扰物类风湿因子、胆红素、甘油三酯、Hb, 使其终浓度如表3。由表3可见RF≤ 1200IU/L、BIL≤ 420μmol/L、TG≤10.0mmol/L、Hb≤4.0 g/L时, 对本法无干扰。

3 讨论

铁蛋白是体内铁储备蛋白, 肝脏是铁的主要贮存器官, 在合成铁蛋白、释放铁蛋白、维持血液中铁蛋白浓度方面起着重要作用。因此, 肝脏损害可直接影响铁蛋白的贮存和代谢, 导致血清铁蛋白含量的改变[3,4]。国外学者Yinon等对证实为不同性质的良恶性疾病引起的胸、腹水患者进行了铁蛋白测定, 并发现良性漏出液中铁蛋白无1例异常改变, 而恶性渗出液铁蛋白超出正常值高达94.4%, 从而表明肿瘤细胞可能是铁蛋白的一个来源, 因此测定铁蛋白也有利于良恶性积液的诊断和鉴别诊断。本文对浙江伊利康生物技术有限公司的胶乳增强免疫比浊法试剂测定血清铁蛋白的方法进行性能评价, 其结果显示精密度CV<4%、回收率为99%、线性范围达600μg/L、类风湿因子≤1200IU/L、三酰甘油≤10mmol/L、Hb≤4g/L、胆红素≤420μmol/L时对结果无显著性干扰 (P>0.05) , 该方法使用方便、反应快速、结果准确, 抗干扰能力强, 适用于全自动生化分析, 能满足临床检测要求。

摘要:使用增强免疫比浊法测定血清铁蛋白, 设置比对、回收、干扰试验对该方法进行性能评价, 结果显示其使用方便、反应快速, 抗干扰能力强, 适用于全自动生化分析, 满足临床检测要求。

关键词:增强免疫比浊法,含量测定,血清铁蛋白

参考文献

[1]杨昌国.精密度评价和方法比较中NCCLS评价方案的应用[J].临床检验杂志, 1999, 17 (1) :47.

[2]杨昌国.线性评价和干扰实验中NCCLS评价方案的应用[J].临床检验杂志, 1999, 17 (3) :184.

[3]潘泊荣.铁蛋白与肝脏疾病[J].临床肝胆病杂志, 1985, 1 (4) :210.

一种增强免疫力中药制剂的研发 篇8

单一的药物只能控制或者缓解某些症状, 很难彻底缓解免疫力低下的复杂身体状况, 复方可以提高疗效, 减少毒副作用。人体免疫系统存在着一定的动态平衡, 许多中药对人体免疫力的调节有着先天优势。本中药制剂进行复方配伍时遵循“君臣佐使”这一重要原则, 以炙黄芪和淫羊藿为君药, 对增强免疫力起主要作用;辅以常用中药人参、茯苓, 能够补气生血, 增强机体免疫力, 起到协调配合君药的疗效;人参和黄芪皆为重要的补气扶正药, 两者合用旺气生血, 可增强机体免疫调节功能[2];同时熟地黄温和滋阴、益精填髓[3], 甘草缓和矫正阳性药物的火烈药性、解毒滋补。本复方可以缓和因人体衰老、生活工作压力过大等原因产生的免疫力下降等一系列身体状况, 达到肝肾阴阳同补、固本扶元、祛邪调理的作用。

1 材料与方法

1.1 材料与设备

1.1.1 材料

炙黄芪、淫羊藿、人参、熟地黄、茯苓、甘草 (安徽济人药业有限公司) ;低聚果糖 (量子高科 (中国) 生物股份有限公司) ;山梨酸钾 (罗盖特精细化工有限公司) 。

1.1.2 设备

Agilent 1260高效液相色谱, 数显恒温水浴锅, 梅特勒-托利多pH计, 电子分析天平, 紫外可见分光光度计, 阿贝折射仪, 超声波清洗器, 低速离心机, 水浴检漏灭菌柜, 高速管式离心机, 自动锁口机, 鼓风干燥箱, 恒温恒湿箱, 提取浓缩罐。

1.2 测定方法

感官:感官鉴定法;可溶性固形物:GB/T 12143;pH:《中华人民共和国药典》 (2010年版) 一部附录ⅦG;重金属、农药残留:GB 5009;粗多糖:硫酸苯酚法;总皂苷:《保健食品检验与评价技术规范》 (2003版) 规定方法;淫羊藿苷:GB/T22247;微生物指标:GB 4789;安全性毒理学试验、功能性实验:卫生部《保健食品检验与评价技术规范》 (2003年版) [6]。

1.3 工艺流程

中药→切片→一次煎煮→过滤→二次煎煮→过滤→合并滤液→离心→浓缩→复配 (低聚果糖、山梨酸钾、纯化水) →煮沸灭菌→冷却→灌装→锁口→热压灭菌→冷却→贴标→装盒→装箱。

1.4 制剂工艺要点

1.4.1 提取

中药炙黄芪、淫羊藿、人参、熟地黄、茯苓、甘草以3∶2∶1∶1∶1∶0.5的比例准确称量并作相应的切片处理, 混合均匀后投入中药提取设备中加入总药重10倍量的纯化水, 夹套中通入蒸汽加热, 煎煮2h, 过滤, 得到第1次滤液和滤渣, 滤渣继续加入总药重8倍量的纯化水煎煮1h, 过滤, 得到第2次滤液。

1.4.2 离心、浓缩

将2次滤液合并, 经过高速管式离心机离心处理 (15 000r/min, 蠕动泵上料) 去除沉淀, 使用中药浓缩设备减压浓缩至相对密度1.12~1.14 (真空度-0.08MPa) 。

1.4.3 配料、灌装

浓缩液转移入配料罐中, 加入占浓缩液总重量50%的低聚果糖糖浆、0.4%的山梨酸钾 (用少量纯化水溶解) , 250%的纯化水, 配制成口服液, 将该口服液煮沸20min, 循环水冷却至室温, 转移至灌装设备, 使用钠钙玻璃瓶灌装至规定的装量, 用铝制防盗盖自动锁口机锁口。

1.4.4灭菌

采用真空检漏灭菌柜热压灭菌方式灭菌 (工艺参数温度121℃, 时间20min) ,

1.4.5 成品

产品放冷后转入后续包装工序贴标、喷码、装盒、装箱即得成品入库。

1.5 口服液包装优点

本复方中药制剂考虑采用口服液的剂型, 钠钙玻璃药瓶包装, 铝制防盗盖密封, 安全卫生, 不会造成交叉污染、受潮结块等状况, 更有以下优点:有效成分分散在介质中, 分散度大、吸收快, 能较迅速发挥作用;能减少成分的刺激性, 生物利用度高;易于区分剂量, 食用方便。

2 结果与分析

2.1 提取条件的确定

炙黄芪、人参、甘草、茯苓及熟地黄中均含多糖类成分, 人参中含有大量的人参皂苷, 淫羊藿主要含以淫羊藿苷为主的黄酮类成分, 故确定本品的标志性成分为粗多糖、总皂苷和淫羊藿苷。多糖类是极性较大的成分, 水和稀醇作为溶媒对多糖类的提取效果较好;总皂苷的提取方法[4]使用较多的是水提煎煮法和醇提回流法, 煎煮法得到的浸膏量较多, 各物质溶出效果好, 而乙醇回流法提取皂苷率都在8%以上, 皂苷含量高;淫羊藿苷根据其理化性质, 用乙醇溶液作为提取溶媒能更多地提取出淫羊藿苷, 这也与赵燕燕[5]报道的淫羊藿苷提取条件筛选正交试验设计结果, 最佳提取工艺为20倍量, 70%乙醇提取3次, 每次0.5h相符, 但是本品为复方制剂, 各原料配伍后综合起效, 所以提取条件不能简单地以淫羊藿苷提取量多少来确定。水提取法是既简单又经济的中药口服液提取方法, 且也符合中药传统的食用方法 (水煎煮法) , 而醇提法会损失绝大部分有益的多糖成分, 因此本产品采用传统的水提取法结合试验筛选, 初步确定采用第1次加入10倍量水提取2h, 第2次加入8倍量水提取1h, 并对此条件进行了3次验证试验, 具体操作:称取炙黄芪120g、淫羊藿80g、人参40g、熟地黄40g、茯苓40g、甘草20g共3份, 分别加10倍、8倍量水提取2次, 第1次提取2h, 第2次提取1h, 过滤, 合并滤液, 加热浓缩, 复配成成品并测定粗多糖、总皂苷和淫羊藿苷的提取量, 结果见表1。

经3批试验结果表明, 传统水提法工艺稳定、可行, 故确定提取工艺条件为:10倍量水提取2h, 过滤;8倍量水提取1h, 过滤;合并2次滤液。

(mg/100mL)

2.2 标志性成分的稳定性

对口服液产品在37℃和相对湿度75%的恒温恒湿箱中加速试验3个月, 每月测定口服液中粗多糖、总皂苷、淫羊藿苷的含量, 经过3个月的加速实验, 标志性成分的变化趋势见图1、图2、图3。

本批次口服液经过3个月的加速试验, 标志性成分含量都有所降低, 其中粗多糖含量减少2.98%, 总皂苷含量减少7.14%, 淫羊藿苷含量减少2.93%, 降幅不是很大, 加速完成的产品中3项指标含量分别为912mg/100mL、117mg/100mL、9.95mg/100mL, 仍高于指标要求, 因此, 该口服液中标志性成分均有较好的稳定性, 在保质期24个月中可以保证产品质量。

2.3 灭菌工艺的验证

2.3.1 验证方法

使用121度压力蒸汽灭菌生物指示剂 (型号ATCC7953, 嗜热脂肪杆菌芽孢) 嗜热脂肪杆菌芽胞嗜热脂肪杆菌芽胞做灭菌工艺验证。热压灭菌效果与灭菌时间、温度、产品装载密度等工艺条件有关, 将灭菌时间设为10min、20min、30min, 在水浴检漏灭菌柜内放置待灭菌产品, 并在灭菌柜前后门处产品的上部、中部、下部各放置一支压力蒸汽灭菌生物指示剂, 温度上升至T=121℃, 工作压力P=150kPa、灭菌时间参考工艺参数, 降温取出灭菌产品及生物指示剂, 指示剂置于56~60℃培养箱中培养48h后取出观察颜色变化, 另取一支未经灭菌的生物指示剂一起培养, 作为阳性对照。

2.3.2 结果判断

在同一个灭菌器中采用不同的灭菌时间进行3次灭菌试验, 灭菌时间分别为10min、20min、30min。根据56~60℃培养48h后生物指示剂颜色判断灭菌效果, 培养后生物指示剂全部保持紫色则灭菌合格, 如有一支由紫色变为黄色则为不合格, 对照管由紫色变为黄色证明该指示剂有效。验证数据见表2。

2.3.3 结论

121℃、10min灭菌不合格, 证明这个条件下灭菌仍有风险, 不宜采用, 20min和30min的灭菌参数条件下, 灭菌都是合格的, 考虑到生产实际情况和能源消耗, 采用121℃、20min灭菌工艺参数, 并作重现性试验验证此工艺参数。根据上述试验结论选择灭菌时间20min, 重复3次灭菌过程, 生物指示剂放置的位置同之前的验证要求一致, 验证灭菌效果的重现性。结果3次灭菌的生物指示剂经56~60℃培养48h后, 均未变色 (保持紫色) , 阳性对照管变黄色, 证明此灭菌条件的灭菌效果重现性良好, 灭菌工艺条件稳定可靠。

3 安全性毒理学评价及功能评价

检测依据:卫生部《保健食品检验与评价技术规范》 (2003年版) [6]。

3.1 安全性毒理学评价

用本品口服液样品制作浓缩液 (浓缩比例10∶1) , 无菌包装, 实验时以浓缩液原液作为受试物, 以蒸馏水为溶媒将样品配制成不同浓度的样品液供试。

大小鼠急性经口毒性试验, 选用SD大鼠和ICR小鼠, 采用最大耐受剂量法, 设样品40.0g/kg一个剂量组, 经口灌胃方式给受试物, 观察一般状况、中毒症状和死亡情况, 观察期限为2周。染毒后, 观察期内均未见大小鼠出现中毒和死亡状况, 雌雄两性急性经口最大耐受剂量均大于40.0g/kg体重, 属于无毒类。

用10倍浓缩液进行Ames试验, 试验菌株选用组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102, 结果为阴性, 小鼠骨髓细胞微核试验和小鼠精子畸形试验, 选用ICR小鼠, 设样品5.0、10.0和20.0g/kg体重三个剂量组, 结果均为阴性, 表明本品无致突变特性。

大鼠30天喂养实验, 试验样品为产品的10倍浓缩液, 设三个剂量组及阴性对照组, 分别相当于人推荐摄入量的25、50、100倍, 实验时用蒸馏水稀释成不同剂量浓度供试, 大鼠选用SD大鼠80只, 随机分成四组, 每组20只, 雌雄各半。实验期间, 各组大鼠均未见异常症状和体征, 也无死亡, 各剂量组各项指标均未见明显毒性反应, 与阴性对照组比较差异均无显著性 (P>0.05) 。

3.2 增强免疫力功能性试验评价

3.2.1 方法

供试样品为产品的10倍浓缩液, 产品人推荐剂量为40mL/60kg/日, 相当于产品的10倍浓缩液4mL/60kg/日。实验设三个剂量组和阴性对照组 (蒸馏水) 。低、中、高三个剂量为产品的10倍浓缩液0.33、0.67和2.0mL/kg体重, 相当于人推荐量的5倍、10倍和30倍。实验用清洁级ICR小鼠, 雌性, 体重 (20±2) g。连续30~35天经口给予不同剂量的受试样品, 阴性对照组给予蒸馏水。

3.2.2 结果

与阴性对照组比较, 受试样品低、中剂量组小鼠溶血空斑数均增加, 差异均有显著性;与阴性对照组比较, 受试样品中剂量组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬百分率和吞噬指数均升高, 差异均有显著性;与阴性对照组比较, 受试样品高剂量组ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力和小鼠左后足跖部24h与0h厚度测量值差值均增加, 差异均有显著性。说明本口服液具有增强免疫力的功能。

4 产品质量控制

该产品按照以下质量标准严格控制质量, 保障产品品质。

4.1 感官评价

棕色至棕褐色液体, 无肉眼可见外来杂质, 允许有少量沉淀, 味苦回甘, 具有原料中药特有的气味。

4.2 微生物指标

菌落总数≤50cfu/mL, 大肠菌群≤6MPN/100mL, 霉菌和酵母均≤10cfu/mL, 致病菌皆不得检出。

4.3 标志性成分指标

粗多糖含量 (以葡萄糖计) ≥800mg/100mL, 总皂苷 (以人参皂苷Re计) ≥100mg/100mL, 淫羊藿苷≥7.0mg/100mL。

4.4 理化指标

可溶性固形物≥12g/100mL, pH为3.5~5.0, 铅含量 (以Pb计) ≤0.5mg/kg, 砷含量 (以As计) ≤0.3mg/kg。

4.5 农药残留指标

六六六≤0.1mg/kg, 滴滴涕≤0.1mg/kg。

5 讨论

现代生活节奏的加快使人们休息睡眠不足、超负荷工作、缺乏锻炼, 使疲劳和免疫力下降, 慢性疾病增多。要预防或减少免疫力低下导致的疾病, 除了要增强自我保健意识、养成良好的生活习惯外, 采取一定的干预措施十分必要。保健食品具有一定的保健功能, 且安全性高、可长期服用, 又可满足人们日常保健的需求, 可大大增强早期预防的意义和价值。

本制剂是针对免疫力下降综合征, 结合现代中药药理研究成果, 以药食同源类或可用于保健食品的中药炙黄芪、淫羊藿、人参、熟地黄、茯苓、甘草等为主要原料经过提取浓缩、离心灭菌等工艺操作制成保健食品, 经过安全性毒理学试验证明属于无毒性产品, 经功能学试验证明具有增强免疫力的保健功能, 长期食用可达到改善体质、增强免疫力的功效。

摘要:目的:优化一种增强免疫力复方中药制剂的提取工艺, 并对研制的复方中药制剂进行稳定性、安全性毒理学评价及功能性评价。方法:以粗多糖、总皂苷和淫羊藿苷含量为指标, 以中药炙黄芪、淫羊藿、人参、熟地黄、茯苓、甘草为原料, 应用正交实验法优化提取工艺, 并对标志性成分的稳定性、灭菌工艺进行验证和评价, 并依据卫生部《保健食品检验与评价技术规范》对研制的复方中药制剂进行安全性毒理学评价及功能评价。结果:最佳提取工艺条件为:初次提取按料液比1∶10煎煮2h, 第2次提取按料液比1∶8煎煮1h。口服液中标志性成分均有较好的稳定性, 在24个月保质期中可以保证产品质量的要求。灭菌条件的灭菌效果重现性很好, 灭菌工艺条件稳定可靠。安全毒理学评价各项指标均未见明显毒性反应, 功能评价为:受试样品高剂量组ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力和小鼠左后足跖部24h与0h厚度测量值差值均增加, 差异均有显著性。结论:建立的提取方法具有提取效率高、工艺简单等优点, 经过安全性毒理学试验证明属于无毒性产品, 经功能学试验证明具有增强免疫力的保健功能, 长期食用可改善体质、增强免疫力。

关键词:复方中药制剂,增强免疫力,中药研制,稳定性、安全性,毒理学

参考文献

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免疫增强治疗 篇9

一、明确内审工作职责, 定位体现内向服务性

加强内部管理和监督, 帮助最高管理层更好地履行职责应该是内部审计的立足点, 服务的内向性是内部审计的一个重要特点, 因此内部审计的监督与服务职能是相辅相成、不可分割的。着眼于新的职能定位, 市局 (公司) 的内部审计应建立一个监督、评价和建议一体化的职能体系, 以实现审计资源的集中管理、优化配置, 审计方法的创新、高效运行, 审计信息客观及时的上通下达, 发挥审计“第三只眼”的作用。第一, 应加强和各部门各科室的沟通和交流, 提出更好的解决问题的方案, 为实现市局 (公司) 的管理目标服务。第二, 内审人员的审计重点要从传统的财务审计转向绩效审计, 同时更多地关注风险管理和内部控制的问题, 提倡监督与服务并重, 坚持立足预防, 抓早、抓小、抓苗头, 通过前移审计关口, 发现一些苗头性、倾向性问题后及时发出警示, 为市局 (公司) 提供有关内部控制与管理方面的决策参考, 充分发挥内部审计在企业经济运行中的预警性和服务性作用。

二、创新内审技术手段, 提高内审工作效率

烟草行业早已实现了会计核算电算化, 而且2009年全行业将按照国家局的要求, 实现统一会计核算软件的全面上线, 会计信息传输真正实现了一体化、网络化, 大大提高了会计信息的真实性和可比性。而我们现在的内部审计还是传统的手工处理, 不仅效率低下, 而且很难查出微机处理过程中的错弊, 严重影响了审计工作质量。因此, 我们内部审计要适应发展的需要, 创新审计手段, 加强审计信息化建设, 加快推进计算机辅助审计。根据行业的特点和实际需要组织软件的引进、开发和应用, 逐步建立功能配套、数据完备、操作简便的审计信息系统, 实现审计证据收集、信息加工、数据传输和审计资源调配信息化、智能化, 使审计信息具有适时性、可靠性、安全性、动态性和共享性的特点, 从而变定时实地审计为实时远程审计, 变事后审计为事前、事中审计, 变静态审计为动态审计, 既提高了审计工作效率, 又提升了审计工作质量, 使审计的监督作用得到加强。

三、拓展内部审计领域, 为行业的改革发展服务

内部审计要坚持“抓基层、打基础、上水平”的工作方针, 紧紧围绕烟草工作的中心任务, 突出内审的“内向性”和“免疫力”, 立足企业经营管理需要, 以经济责任审计和经济效益审计为龙头, 以基本建设项目和大额物资采购审计为重点, 以日常财务收支类审计为基础, 拓展内部审计领域, 坚持凡离必审、届中必审、重大开支必审、基建工程必审等“四个必审”, 加大内部审计监督力度, 认真履行审计监督、评价、服务与保障职责, 为领导正确决策当好参谋, 降低经营风险, 确保国有资产安全、完整、保值、增值, 充分发挥内部审计在企业经济运行中的建设性和促进性作用。

(一) 开展经济效益审计, 确保经济安全高效地运行

开展经济效益审计的目的是发现和揭示影响经济效益的问题, 帮助企业寻找解决问题的途径和办法, 提出管理和改进措施, 促进被审计单位提高经济效益。如果将目标具体化, 现阶段内部审计开展经济效益审计的目标是审查、评价被审计单位 (或项目) 的经济性、效率性、效果性。开展经济效益审计应主要从三个方面入手:一是事前。主要审查计划、预算及投资项目的可行性研究等, 对未来的经济活动可能产生的结果进行评价, 促使未来的经济活动方案更加合理, 更加可行, 更为有效;二是事中。通过把经济业务的实施情况与事前的计划和预算进行分析比较, 从中找出差距和存在的问题, 督促有关部门根据实际情况修正计划、预算, 使之更符合客观实际;三是事后。对已完成经济活动的经济性、效益性和效果性进行评价, 以进一步寻求提高经济效益的途径。

(二) 开展经济责任审计, 促进企业增收节支

在开展经济责任审计时, 本着效益优先的原则, 改变以往经济责任审计单纯以财务收支审计为主的做法, 把效益审计引入经济责任审计中, 把审计工作的落脚点放在促进增收节支上, 突出“六查六看”。即查财务收支是否合规合法, 看有无预算执行不到位的问题;查资产是否真实完整, 看有无资产流失、侵占问题;查重大经济事项决策是否遵循程序、民主科学决策, 看有无基建、大宗物资采购等重大经济事项决策个人说了算, 导致决策失误问题;查内部控制制度是否健全有效, 看内部财务管理是否健全, 是否按审批权限和规章制度办事;查领导关注和群众反映的重大问题, 看有无利用职权损公肥私等个人捞好处问题;查上年审计指出的问题整改情况, 看该纠正的问题是否纠正, 有无屡查屡犯的问题。通过将经营者的经营业绩与任期前的情况进行纵向比较, 对资产质量等情况加以比较分析, 明确责任, 评价被审计人所在单位发展潜力及其变化趋势, 评价总资产和增量资产的结构和质量, 审核评价领导干部履职尽责实绩, 在经济决策科学性、用财方向合理性、建设成果真实性、内控制度完备性等方面的真实情况。通过审计这种特殊的手段和服务, 强化了领导者的经营意识, 提高了国有资产的运营效果。

(三) 开展全面预算管理审计, 确保预算的分解落实

2008年姜成康局长在全国商业系统预算管理现场会上强调:要全面推动预算管理工作, 降低成本费用。要把加强预算管理作为加强基础管理最重要的工作切实抓好, 全面开展对标活动, 促进行业实现节约发展。为此, 我们要把加强全面预算管理作为加强基础管理的重要任务, 完善预算管理制度, 严格执行预算规定, 充分发挥预算硬约束作用, 严格控制会议、差旅、招待费用, 严格执行工效挂钩有关政策规定, 控制成本费用水平。通过定期不定期地实施审计监督, 及时发现和纠正预算执行中存在的问题, 重点检查预算调整是否按照规定的程序进行, 预算调整的理由是否充分、适当, 重点检查是否建立科学的分析考核制度和是否落实了兑现奖惩措施, 彻底解决“监而不控”或“监而难控”的问题, 控制和减少预算随意性, 维护预算的严肃性, 增强预算的刚性。我们将对本级的预算执行情况进行定期审计, 每半年检查分析一次;对所属县局 (营销部) 预算执行情况, 每月进行一次检查分析, 找出差距, 及时分析查明原因, 采取措施加以纠正或督促整改。必要时还将进行后续审计。

(四) 开展内部控制系统审计, 促进企业健康有序运行

内部控制制度是企业为了保证实现经营管理目标, 在分工负责的前提下, 组织内部经营活动而建立的各职能部门之间对业务活动进行组织、制约、考核和调节的程序和方法, 用以明确企业内部各职能部门的职责和权限, 形成一种相互联系、协调、制约的控制系统。内部控制系统是企业为了推进经济实体的有效运营而制定并在实施执行中不断加以改进的, 而内部审计部门则在于协助管理层调查、评估内部控制制度的健全性和有效性, 适时提供改进建议, 以求内部控制制度得以持续实施。实践证明, 任何一个企业的管理活动, 凡是内部控制系统健全并执行良好的, 其业务处理正确化程度就高, 发生错弊的机会就少;反之, 其正确程度就越低, 发生错弊的情况就越多。开展内部控制系统审计的重点是测试和评价, 即测试是否存在程序违背和环节疏漏, 控制系统是否到位, 对营销、专卖管理等内控制度的健全性、合理性、符合性、有效性进行评价。2009年我们拟全面实行“经济业务报审表”和固定资产投资、大额物资采购及重大费用开支流程登记簿制度, 通过对企业内部控制程序以及执行情况进行全过程、全方位的监督和评价, 发现执行过程中存在的问题, 帮助企业堵塞漏洞, 严密内控措施, 降低经营风险, 使内部审计在企业的经营管理领域增加价值。

(五) 开展固定资产投资审计, 提高资金使用效益

我们将对固定资产项目投资的全过程进行跟踪审计, 在前期准备阶段检查立项、审批、征地、概算、设计招标等程序是否符合规定进行检查;在实施阶段对施工、监理、采购招标是否符合有关规定, 是否按合同规定和工程进度付款, 是否超出预算进行检查并分析其原因;在竣工决算投入使用阶段对工程质量、工期是否符合要求, 对工程决算进行检查审计, 坚持不审计不结算, 先审计后付款。此项审计由于具有较强的专业性, 目前可采取内审参与、协调和委托中介机构审计相结合的方法。

(六) 开展实时后续审计, 督促审计结果和处理意见的落实

后续审计是内部审计工作的重要组成部分, 是体现内部审计工作价值的重要环节, 是整个审计活动的持续和延伸, 对监督、评价审计发现的问题的整改、确保组织目标的实现具有不可或缺的作用。要坚决杜绝对审计发现的问题整改不力, 年年提及, 年年“照旧”, 屡审屡犯的问题, 维护内部审计的权威性。一是要建立审计整改报告制度, 要求被审计单位在规定期限内将审计发现的问题整改情况和审计意见落实情况书面报告上级主管部门和审计部门;内审部则要对被审单位的整改情况进行跟踪汇总和综合分析, 定期报告。二要建立审计整改联动机制, 定期组织召开联席会议, 加强与财务、法规、后勤服务中心等相关部门的沟通与协调, 按照规定的职能分工认真履行整改工作职责, 齐抓共管, 整体联动。三要建立审计整改跟踪督办制度.审计部门对被审计单位的反馈情况, 要有重点地进行跟踪抽查;对在规定的期限内未能整改、整改不彻底或确有困难一时难以整改的历史遗留问题要实行重点督办。

四、加强内审人员的考核培训, 全面提升内审人员素质

内审人员是内部审计的直接执行者, 其素质的高低直接影响了内审工作效果的好坏, 因此加强内审人员的管理、考核和后续培训是完善企业内部审计制度的关键。一是要建立内审人员资格认定制度, 提高内审人员的整体素质。二是明确内审人员的责任界定。如:违规审计、违规操作、渎职等造成的审计失误或审计风险的, 应予以追究相应的审计责任。三是要规范内审人员的职业后续培训制度, 注重工程项目、法律法规、信息技术、企业管理及新的财经政策和精神的学习培训, 弥补知识缺口, 增强专业技能;还可硬性规定每年每个内审人员接受职业后续教育的时间不得少于多少学时, 对于无故缺席或没有完成学时者, 给予相应的处罚等。这样有助于内审人员了解行业动态、学习掌握新知识, 适应日益激烈的市场竞争的需要。

总之, 我们要始终以围绕企业的中心工作、服务大局为宗旨, 以“关口前移、突出绩效、提升成果、加强整改”为导向, 通过开展多层次多方面的审计工作, 在做好审计成果的“深加工”和“精加工”上下功夫, 从不同的角度, 及时提炼、分析、整合审计资源, 在揭露和查处问题的同时, 更多地从治本的角度去考虑问题的成因及其后果, 从源头上和根本上提出解决问题的意见和建议, 为企业的经营管理提供真实、可靠的审计信息, 充分发挥内部审计在企业经济运行中的预警性、建设性、服务性、促进性作用, 铸起“免疫盾牌”, 更好地保障经营安全有效进行、企业持续稳定地发展。

摘要:内部审计在烟草行业的经营管理中显得越来越重要。文章强调要强化内部审计监督, 增强内审人员服务意识, 充分发挥内部审计的职能。为达成此目标, 文章认为需从四个方面进行努力。

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