男性性功能检测方法（共14篇）
你可以说一个男人能力不足，也可以说一个男人态度不好，但试想，如若您嘲笑一个男人下面不行，会收到什么回馈?迎接你的或许是一记重拳，这种推测完全不会夸张。
在对待自己的性功能方面，男人的表现往往有点神经质。一旦发现自己的性能力较以前质量有所变化，就忧心忡忡，老怀疑自己的性功能减退。有些人甚至找一些乱七八糟的“狗皮膏药”乱吃一通，直到不见效果和适得其反。着急之下才找医生检查，此时，要么没问题纯属心理作怪，要么情况已发展到非常严重的地步，治疗起来也相当困难。
大多数的男性都希望能了解自己的性能力是否“足够”。那么，如何来客观地评价自己的性能力呢?
1、观察自己的勃起情况：年轻力壮者无论何时，一旦对性产生兴趣，迅速勃起。中年后在勃起可能需要一段时间，一旦勃起就能进行满意的性交。这都属于正常情况。
(1)如有时能勃起，有时不能勃起。这就说明性功能有所下降，但问题不大。
(2)虽能勃起，但不不持久，容易早泄。这就说明性功能有所下降，但问题不大。可通过加强锻炼，适当保健，强化心理调整来改善。
(3)如发现在较长时间段，从没有勃起。这说明问题比较严重，应接受检查后，再采取相应的对策。
2、留意自己的性欲产生方式和频次：性欲充沛者每次性生活多主动促产生，及时对方主动也能产生积极的性趣来尽情配合。这都是正常情况，大可不必为自己的性功能担心。
(1)如非对方主动诱导，否则单方面绝提不起对性的兴趣来。就说明你的性能力出现了问题，但配合心理医生和男科医生，采取适当的方法问题就可以解决。
(2)如不管对方怎样诱导，也没有那种怦然心动的体会，如无心理障碍就说明问题很严重了，必须找医生进行检查。
3、关注自己对性的敏感性或关注度：可测定性生理和心理的健康状况。正常情况下，无论年龄多大，如看到年轻漂亮的异性，都会有所想象，或见到异性裸露的肌肤，会有不自觉接触的欲望，这种情况都属于正常。
但有些遇到异性或者异性与之亲近也无所视事，或只能在交谈中感到快乐，从来不会产生性的想象，这就说明他们的 性感受开始变得迟钝，需要通过专业人员的检查和指导，或者进行专业方面的调节性兴奋的程度。
通过对相关问题和要点的对照，然后大概地判断自己的性能力状况。需要提醒的是“这种测试首先要排除自己非心理性性功能障碍或性减退等情况”，如果通过检测有可疑性功能减退，需及时到专科就诊做进一步确切检查。纯中药【→超邦黄精胶囊←】，它是纯中药产品无副作用，不含激素，具有补气养阴，健脾，润肺，益肾功能。治疗阳痿早泄，效果非常好的
关心男性健康，幸福你我同享
摘自：超邦黄精胶囊
1 材料与方法
1.1 临床资料
门诊男性不育症、前列腺炎及淋病患者228例, 年龄23～48岁。临床表现一般无全身症状, 少数有尿道刺激症状, 排尿微痛或排尿不尽感, 个别有尿道口分泌物。
1.2 取材和方法
将228例患者随机分为3组, 分别用1、2、3方法检测。
方法1:患者排尿后, 取胸膝卧位, 按常规方法行前列腺按摩收集按摩出的前列腺液于无菌试管中, 直接涂片3张, 加盖玻片置显微镜下观察, 以查到梨形或椭圆形螺旋状运动的虫体位滴虫阳性。对滴虫阳性者用染色法确证。
方法2:患者禁欲3d, 手淫法采集一次射精全部精液于无菌小烧杯内, 置37℃水浴保温。液化后直接涂片3张, 加盖玻片置显微镜下观察, 阳性标准同方法1。
方法3:患者取样前至少1h不排尿, 取前段尿8m L于无菌试管中, 离心后弃去上清液, 取尿液沉淀物直接涂片3张, 阳性标准同方法1。
2 结果
采集方法不同的3种标本检测结果见表1。χ2检验表明, 方法1的阳性检出率明显高于方法2 (χ2=4.28, P<0.05) 和方法3 (χ2=5.67, P<0.05) , 方法2与方法3之间阳性检出率无显著性差异。23例滴虫阳性患者中, 有18例其配偶白带检查有阴道毛滴虫感染。
3 讨论
本文分别用3种取材方法对男性患者进行了阴道毛滴虫涂片检查, 总阳性率为10.09%, 表明在男性不育患者、前列腺炎及淋病患者中滴虫感染率较高, 这与有关报道一致[2]。因此, 对于以上患者进行阴道毛滴虫检测十分必要。比较结果显示, 方法1检出率明显高于方法2和方法3, 原因可能是用前列腺液检测滴虫, 标本中滴虫含量较高, 从而提高了检出率。
参考文献
[1]郭永和, 刘永春, 秦剑.阴道毛滴虫感染与男性不育症关系的研究[J].中国寄生虫病防治杂志, 2006, 13 (2) :160.
勃起有障碍是让男性颜面扫地的事，当过性生活的时候情绪上面都到位了，阴茎虽然是能勃起，却总是不够硬，这让男性朋友很是困扰。那么男性如何预防勃起功能障碍呢?下面专家为大家解析原因。
(1)普及性知识教育，正确对待性的自然生理功能，减轻对房事的焦虑心理，消除不必要的思想顾虑，避免精神性勃起功能障碍的发生。
(2)戒除手淫的不良习惯，切勿恣清纵欲，贪色无度。
(3)避免各种类型的性刺激，停止性生活一段时间，用来保证性中枢和性器官得以调节和休息，有利于意志的调节和疾病的康复。
(4)积极治疗可能引起勃起功能障碍的各种疾病。夫妻双方都有责任，女方要体贴，谅解男方，切不可指责或轻视男方，使患者在谅解、理解的基础上增强信心，以有益于精神调养。
2、运动治疗：坚持每周三次以上，每次时间必须超过30分钟。慢跑、跳绳、游泳、太极、瑜珈等有氧运动锻炼身体;
3、中药治疗：可以中医辨证分辨是阳虚还是阴虚引起，可以服用中成药或药剂催情和调节;治疗周期长，费用高，治疗完成后要定期确认、保养;
4、食物治疗：按照中医辨证清阴虚还是阳虚，选择食物长久进行调整;日常饮食多吃韭菜、虾、泥鳅、生蚝等食物。
5、西药治疗：服用辉瑞的万艾可、礼来的希爱力、拜耳的艾力达等伟哥药物，但有心脏病、血管病的不能服用，并有药物依赖性;
6、手术治疗：包含包皮切除、脱敏背离神经切除等;效果明显，但手术费用高，
7、外用药物：延时外用精油、喷剂、湿巾等类型产品。分为几种：
7.1、外用麻醉性，针对阴茎的高敏感，通过喷或涂摸吸收，降低敏感区域敏感度，到达延时效果。
7.2、外用补肾性，通过按摩腰部、腹部吸收，刺激身体穴位，增加血液流动，达到延时效果。
1 资料与方法
1.1 一般资料
入选标准:(1)男性;(2)年龄21~49岁;(3)肾移植前行透析治后血肌酐水平稳定在445μmol/L以下;(4)肾移植术后血肌酐水平在200μmol/L以下;(5)肾移植后稳定期>6个月;(6)无严重心血管疾病及糖尿病。患者知情同意,采用匿名方式参与调查。原发病:肾动脉硬化症5例,糖尿病肾病2例,多囊肾7例,肾小球肾炎136例。术前血液透析治疗1~29个月。接受血液透析者59例,其余为腹膜透析,平均尿毒症时间为3.42年(3个月~13.5年)。移植术后均采用环孢素A+晓悉+强的松三联免疫抑制剂。
1.2 研究方法
采用性功能问卷自测和个别直接询问相结合,包括术后遗精、性欲、阴茎勃起情况,每月性生活次数、满意程度,有无术后阴囊异常肿大等。分别于术前及肾移植术后1、3、6个月时抽取静脉血测定血清睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成激素(LH)、和催乳素(PRL)。
1.3 统计学方法
以均数±标准差表示,用自身对照t检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
术前未婚患者有20例,其中有性欲患者14例,遗精1~2次/月;已婚患者有130例,患病后性欲明显下降,透析期间有性生活者31例,1~2次/月性生活。术前未婚的20例年龄均处于21~25岁,12例患者术后每月性生活1~2次,持续4~8min;术后1~3个月有遗精患者共8例。己婚患者中术后有性欲,但无勃起功能及遗精者共14例,既无性欲,亦无遗精者共12例,其年龄段均位于45~49岁;其余104例患者年龄处于23~45岁,均在术后3个月内性生活平均1~2次/月,80.0%(104/130)对性生活满意,手术侧阴囊未较术前肿大。肾移植术前后血清性激素水平变化见表1。
注:#与术前比较,P<0.01
3 讨论
慢性肾功能不全可引起患者多器官脏器的损害,常常发生性功能减退,由于尿毒症的毒素等因素损害下丘脑-垂体性腺轴功能[2]。目前替代疗法中,血液透析和腹膜透析,虽能使血清肌酐及尿素氮有所下降,但无法完全纠正肾功能不全所引起的代谢紊乱,更不能替代肾脏的内分泌功能,所以透析疗法对尿毒症患者的垂体-睾丸轴的功能无明显改善作用[3]。据报道肾移植患者病前有性生活能力的为96%~97%,而患病后为31.2%~54.9%[4,5],在维持性血液透析(HD)治疗期间有性生活能力的为35%[6]。
本组治疗说明,肾移植术后,患者性激素虽未能完全恢复正常,但较术前明显好转,血清T值在术后3个月内恢复正常,考虑肾移植可能通过改善垂体-性腺轴改善患者性功能。术后仅14例患者无勃起及遗精,考虑与年龄因素相关。结果与Koutsikos等报告[7]基本一致。De Celis等[8]对通过回顾性分析55例肾移植患者的性功能和性激素水平发现,成功肾移植后大多数患者的性功能和性激素均较移植术前明显好转。肾移植是解除垂体-性腺激素紊乱的有效方法。
综上所述,肾移植患者病情越重,性生活质量越低,目前透析治疗仅能维持患者生存需要,无法提高性生活指标。成功的肾移植能通过改善垂体-性腺激素紊乱提高患者性功能。
摘要：目的 评价肾移植术后男性患者的性功能。方法 测定150例男性成功肾移植术后患者术前、术后1、3、6个月血清睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成激素(LH)、和催乳素(PRL)水平及术后6个月内性功能恢复情况。结果 150例患者术后89例2～4个月内恢复性生活,术后6个月血清T值恢复正常,患病前均有性生活能力,患病后有性生活能力者82例,占54.7%,术后为114例,占76.0%。结论 成功的肾移植能通过改善垂体-性腺激素紊乱提高患者性功能,受者术后的心理干预、药物干预等均有助于提高肾移植患者性功能,提高性生活满意度。
关键词：性功能,肾移植,肾功能衰竭
参考文献
[1]刘贞,刘仰东,杨元锋,等.肾移植患者勃起功能的评价与健康教育[J].解放军护理杂志,2002,19(1):15-16.[2]Koutsikos D.Fertility and relatsdhorrnones after successful renaltransplantation[J].DialyTransplant,1992,21(3):697.[1]刘贞,刘仰东,杨元锋,等.肾移植患者勃起功能的评价与健康教育[J].解放军护理杂志,2002,19(1):15-16.[2]Koutsikos D.Fertility and relatsdhorrnones after successful renaltransplantation[J].DialyTransplant,1992,21(3):697.
[3]唐智胜,姜书传,李永信.血液透析对男性终末期肾衰患者垂体-睾丸轴的影响[J].中华器官移植杂志,1992,13(1):45-46.[3]唐智胜,姜书传,李永信.血液透析对男性终末期肾衰患者垂体-睾丸轴的影响[J].中华器官移植杂志,1992,13(1):45-46.
[4]张卫东,张思孝,沈虹.男性肾移植患者性功能变化的调查[J].临床泌尿外科杂志,1996,11(2):111-112.[4]张卫东,张思孝,沈虹.男性肾移植患者性功能变化的调查[J].临床泌尿外科杂志,1996,11(2):111-112.
[5]赵国富,仇连峰,王志余.男性肾移植67例术后性功能变化的临床观察[J].中原医刊,1998,25(9):45-46.[5]赵国富,仇连峰,王志余.男性肾移植67例术后性功能变化的临床观察[J].中原医刊,1998,25(9):45-46.
[6]Rodriguez RR,Burgos RFJ,Gomez DV,et al.Endocrine changes and sexual dysfunction in kidney transplantation and hemodialysis:comparative study[J].Actas Urol Esp,1996,20(8):697-701.[6]Rodriguez RR,Burgos RFJ,Gomez DV,et al.Endocrine changes and sexual dysfunction in kidney transplantation and hemodialysis:comparative study[J].Actas Urol Esp,1996,20(8):697-701.
[7]Koutslkos D.Hormonal profiles in successful renal transplant male recipients[J].Transplant Proc,1990,22(4):1399.[7]Koutslkos D.Hormonal profiles in successful renal transplant male recipients[J].Transplant Proc,1990,22(4):1399.
手术治疗
肛瘘不能自愈，必须手术治疗。手术治疗原则是将瘘管全部切开，必要时将瘘管周围瘢痕组织同时切除，使伤口自基底向上逐渐愈合。根据瘘管深浅、曲直，可选用挂线疗法、肛瘘切开或切除术。少数可行肛瘘切除后一期缝合或游离植皮。
(一)挂线疗法
这是一种瘘管缓慢切开法。系利用橡皮筋或药线的机械作用(药线尚有药物腐蚀作用)，使结扎处组织发生血运障碍，逐渐压迫坯 煞费苦心;同时结扎线可作为瘘管引流物，使瘘道内渗液排出，防止急性感染发生。在表面组织切割的过程中，基底创面同时开始逐渐愈合。此种逐渐切割瘘道的方法最大优点是肛管括约肌虽被切断，但不致因括约肌收缩过多而改变位置，一般不会造成肛门失禁。
本法适用于距离肛门3～5cm以内，有内外口低位或高位单纯性直瘘，或作为复杂性肛瘘切开或切除的辅助方法：
1、方法
⑴侧卧位，先在探针尾端缚一橡皮筋，再将探针头自瘘管外口轻轻向内探入，在肛管齿线附近处找到内口;然后将食指伸入肛管，摸查探针头，将探针头弯曲，从肛门口拉出。注意在插入探针时不能用暴力，以防造成假道。
⑵将探针头从瘘管内口完全拉出，使橡皮筋经过瘘管外口进入瘘管。
⑶提起橡皮筋，切开瘘管内外口之间的皮肤层，拉紧像皮筋，紧贴皮下组织用止血钳将其夹住;在止血钳下方用粗丝线收紧橡皮筋并做双重结扎，然后松开止血钳。切口敷以凡士林纱布，术后每天用热1∶5000高锰酸钾溶液坐浴，并更换敷料，一般在术后10d左右，肛瘘组织被橡皮筋切开，2～3周后创口即能愈合。
2、本法优点
⑴手术简单，操作快，出血少。
⑵在橡皮筋未能脱落时，皮肤切口一般不会发生“架桥”。
⑶换药方便。
3、保持挂线成功的要点
⑴要准确地找到内口，一般在探针穿出内口时，如不出血，证明内口位置多正确。
⑵伤口必须从基底部开始，使肛管内伤口先行愈合，防止表面皮肤过早粘连封口。一般橡皮筋在7～10d可以脱落。若10d后还不脱落，说明结扎橡皮筋的丝线较松，需要再紧一次。
(二)肛瘘切开术
手术原则是将瘘管全部切开，并将切口两侧边缘的瘢痕组织充分切除，使引流通畅，切口逐渐愈合。本法仅适用于低位直型或弯型肛瘘。操作方法如下。
1、正确探查内口，寻找内口的操作与挂线疗法相同，探得内口后，将探针拉出肛门外，如瘘管弯曲或有分支，探针不能探入内口，则由外口注入1%美蓝色素溶液少许，以确定内口部位，再由外口以有槽探针探查，将管道逐步切开，探查，直至探到内口为止。如仔细探查仍不能找到内口，可将疑有病变的肛窦作为内口处理。
2、切开瘘管并充分切除边缘组织，切开瘘管的全部表浅组织，由外口到内口及相应的肛管括约肌纤维。瘘管切开后应检查有无支管，如发现也应切开。瘘管全部切开后即将腐烂肉芽组织搔刮干净，一般不需要将整个瘘管切除，以免创面过大。最后修剪伤口边缘，使伤口呈底小口大的“V”字形，便于伤口深部先行愈合。
3、肛管括约肌切断，术中应仔细摸清探针位置与肛管直肠环的关系，如探针在肛管直肠环下方进入，虽全部切开瘘管及大部外括约肌及相应内括约肌，由于保存了耻骨直肠肌，不致引起肛门失禁，如探针在肛管直肠环上方进入直肠(如括约肌上肛瘘，括约肌外肛瘘)，则不可做瘘管切开术，应做挂线疗法或挂线分期手术。第一期将环下方的瘘管切开或切除，环上方瘘管挂上粗丝浅，并扎紧。第二期手术俟大部分外部伤口愈合后，肛管直肠环已有粘连固定，再沿挂线处切开肛管直肠环。瘘管切开后，其后壁肉芽组织可用刮匙刮去，一般不必切除，以减少出血和避免损伤后壁的括约肌。切除瘘管组织应送病理检查。
4、伤口处理，术后伤口的处理往往关系到手术的成败，关键在于保持伤口由基底部逐渐向表面愈合。每日更换敷料一次，最好在排便后进行，伤口内填充敷料逐渐减少，直到肛管内创口愈合为止。每隔数日做直肠指检可以扩张肛管，更可防止桥形粘连，避免假愈合。
(三)肛瘘切除术，与切开术不同之处
在于将瘘管全部切除直至健康组织。本法又适用于管道较纤维化的低位肛瘘。方法：先从瘘管外口注入1%美蓝，继用探针从外口轻轻插入，经内口穿出。用组织钳夹住外口的皮肤，切开瘘管外口周围的皮肤和皮下组织，再沿探针方向用电刀或剪刀剪除皮肤、皮下组织、染有美蓝的管壁、内口和瘘管周围的所有瘢痕组织，使创口完全敞开。仔细止血后，创口内填以碘仿纱条或凡士林纱布。
(四)肛瘘切除一期缝合
本法始于Tuttle(1903)，但未能推广，原因可能是，理论上不太充足;手术结果不满意;许多肛肠外科专家反对。至1949年，Starr又再次提出此法，并提出一些有效措施，效果较满意，才得以推广。本法仅适用于单纯性或复杂性低位直型肛瘘，如触到瘘管呈硬索状，则效果更好。手术要点：
①术前肠道要准备，手术前后应用抗生素，手术后大便要控制5～6d。
②瘘管要全部切除，留下新鲜创面，保证无任何肉芽组织及疤痕组织遗留。
③皮肤及皮下脂肪不能切除过多，便于伤口缝合。因此，高位弯型肛瘘不宜缝合，因其分支较多，常需切除过多的组织才能切净其分支。
④各层伤口要完全缝合对齐，不留死腔。
⑤术中严格无菌操作，防止污染，如切破瘘管等。综合国内文献报道的肛瘘切除缝合术1064例，一期愈合率为73.4%～97.6%，伤口愈合时间为20～22d，一期愈合较低的多为复杂性高位肛瘘。
(五)肛瘘切除后植皮
肛瘘切除后，若创面过大、表浅而又无特殊并发症者，可考虑游离植皮。手术前后要求同肛瘘切除一期缝合术。手术要点：
①创面应平坦，止血要完全。
②游离植皮区皮肤缝合要完全，并要加压固定包扎，防止创面下存留气体或血液，这是手术成功的重要措施之一。
③若创面渗血较多，则需延迟植皮，即先在创面敷以凡士林纱布，2～3d后再做游离植皮。Hughes(1953)报道40例，有30例植皮完全成功，其余大部成活。Goligher(1975)报告22例，均为低位肛瘘，效果较差，仅13例完全成活。
(六)蹄铁型肛瘘的治疗
应采用瘘管切开加挂线疗法。如后蹄铁型肛瘘，先用有槽探针从两侧外口插入，逐步切开瘘管，直到两侧管道在接近后中线相遇时，再用有槽探针仔细地探查内口。内口多在肛管后中线附近的齿线处，如瘘管在肛管直肠环下方通过，可一次全部切开瘘管和外括约肌皮下部和浅部。如内口过高，瘘管通过肛管直肠环的上方，须采用挂线疗法。即切开外括约肌皮下部、浅部及其下方的瘘管，然后用橡皮筋由剩余的管道口插入，经内口引出，缚在肛管直肠环上，这可避免因一次切断肛管直肠环而造成肛门失禁。然后剪除切口边缘的皮肤和皮下组织，使创面敞开，并刮除瘘管壁的肉芽组织。创面填以碘仿或凡士林纱条。
(七)滑动性粘膜瓣前移闭合内口
完整切除瘘管和内口后，应用粘膜瓣移位修补直肠处缺损，该瓣实际上包括部分厚度的直肠壁以增加其强度。本法优点：
①保留了大部分括约肌，适用直肠阴道瘘及高位经括约肌肛瘘;
②瘢痕形成少;
③避免了解剖畸形;
即性感集中训练。在性行为中，男性们在有射精的感觉时，可以停止阴茎的抽动，转移自己的注意力，把阴茎留在阴道内，女性在性兴奋时阴道扩张，龟头没有接触阴道壁，可以降低龟头的刺激而降低性兴奋，等到射精预感完全消失，再进行性交，这样反复的间断性交，可以有效的防止早泄。
行为治疗
通过使用一些麻醉剂或类似药物降低龟头的敏感性，然后通过妻子对阴茎有素的反复训练，以延缓射精紧迫感，提高射精阈值。
药物治疗
中医中药对于早泄的治疗效果不错，需要患者坚持服用药物一些疗程。有些西药会引起嗜睡，故对伴有失眠、焦虑、紧张等症状的患者疗效较好。
心理疗法
引起早泄常与我们的心理因素有很大的关系，要治疗男性的早泄就要对心理加以分析，采取一定的方法，或暗示，或转移，或厌恶疗法等，矫正一些错误的性观念，消除患者的焦虑，进而达到初步的治疗效果。
物理疗法
肺炎球菌疫苗的保护机制主要是通过特异性抗体介导的调理吞噬作用将体内的肺炎球菌清除。所谓调理吞噬作用是指抗体、补体与吞噬细胞表面结合, 促进吞噬细胞吞噬细菌等颗粒性抗原的作用。由此可见, 注射疫苗后只有机体产生能够有效介导调理吞噬作用的功能性抗体, 才能发挥真正的免疫保护作用。通过体外调理吞噬实验 (opsonophagocytic assay, OPA) 检测抗体的调理吞噬活性, 能够直接反映功能性抗体含量, 实现对疫苗保护效力的准确评估[6]。已有多项研究表明, OPA与疫苗临床有效性的相关性要高于ELISA[7,8]。
近年来, 国际上多个实验室开始致力于OPA技术的研发, 试图建立一套稳定、可靠、标准化的检测方法。美国阿拉巴马大学通过长期探索, 建立了优化的多重调理吞噬实验 (multiplexed opsonophagocytic killing assay, MOPA) , 可同时对4种血清型的肺炎球菌功能抗体进行检测, 简化了实验流程, 减少了工作量并节约血清样本, 提高了OPA技术的检测通量[9]。并且国外部分药企已经开始采用OPA方法进行肺炎链球菌疫苗的临床效力评价[8,10,11]。但由于该方法操作较为复杂, 技术要求高, 目前国内该方法的研究和应用比较缺乏。本研究参考美国阿拉巴马大学大学的MOPA实验, 结合国内的实际情况, 旨在建立一套适合我国应用的肺炎链球菌疫苗效力评价方法。
1 材料与方法
1.1 材料
HL-60细胞系购自美国ATCC (CCL-240) ;13个血清型的肺炎链球菌菌株 (带有特定抗生素抗性) 来源于美国阿拉巴马大学伯明翰分校Moon H Nahm实验室;5份血清样本来源于23价肺炎球菌多糖疫苗免疫后的健康人群;SPF级新西兰乳兔 (3~4周龄) 由中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室提供。
1.2 试剂
BactoTMTodd Hewitt Broth (THB) (批号:3071477) 、酵母提取物 (批号:2220095) 购自Becton Dickinson公司;RPMI1640 (批号:1393807) 、胎牛血清 (批号:1428479) 购自Gibco公司;二甲基甲酰胺 (DMF) (批号:3345C432) 、2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑 (TTC) (批号:2532B313) 购自Amresco公司;Anti-CD11b PE (批号:2184659) 、Anti-CD35PE (批号:2326940) 、Anti-CD71PE (批号:2292633) 、Annexin V FITC (批号:2202518) 、Propodium Iodide (PI) (批号:SLBB4626V) 和Annexin V Binging Buffer (批号:30435) 购自BD Pharmingen公司;4种抗生素:奥普脱欣 (Optochin, 批号:051M1257V) 、奇霉素 (Spectinomycin, 批号:102K05447V) 、甲氧苄氨嘧啶 (Trimethoprim, 批号:BCBC9232V) 、链霉素 (Streptomycin, 批号:2036B318) 购于Sigma公司。
1.3 仪器
菌落计数器 (型号:Proto COL 3) 购自英国Synbiosis公司;流式细胞仪 (型号:FACS Calibur) 购自美国BD公司。
1.4 HL-60细胞的培养及主代细胞库的建立
从ATCC购买的原始HL-60细胞经复苏、增殖培养、再冻存建立一个主代细胞库 (80管) 。
1.5 HL-60细胞的分化及鉴定
使用DMF诱导HL-60细胞分化5 d, 用流式细胞仪进行检测。具体分化步骤及鉴定方法参考文献[12]。
1.6 肺炎链球菌工作种子批的制备及鉴定
1.6.1 肺炎链球菌工作种子批的制备
来源于美国阿拉巴马大学的各型肺炎链球菌, 37℃培养过夜后转移至THY液体培养基中继续培养至OD600为0.6~0.9, 收集培养液加80%甘油混匀后分装冻存, 制备工作种子批。
1.6.2 冻存菌种活力检测
将冻存菌种与未经冷冻的细菌同步稀释后, 37℃过夜培养后进行菌落计数, 计算冷冻细菌的复活率。
1.6.3 冻存细菌抗生素抗性及敏感性检测
在分别含4种抗生素 (奥普脱欣、奇霉素、链霉素、甲氧苄氨嘧啶) 的培养基和不加抗生素的对照培养基中, 划线接种13个型的肺炎链球菌, 37℃培养过夜后进行观察。
1.6.4冻存细菌工作稀释度的确定
按照参考文献[12]的方法进行工作稀释度的测定。选择菌落数为80~120 cfu/spot的稀释度作为最佳稀释度。
1.7 补体制备及鉴定
取SPF级新西兰乳兔颈动脉采血获得补体, 按照文献[12]的方法测定该批次补体的非特异性杀菌率。
1.8 调理吞噬试验
将待测血清在56℃水浴中灭活30 min, 按照参考文献[12]的方法进行操作。经菌落计数后, 用软件Opsotiter3计算样本的调理吞噬滴度。
2 结果
2.1 HL-60细胞的表面标志鉴定和活力测定
经测定, 未分化的HL-60细胞表面标志表达量:CD35为7.03%, CD71为88.87%, 活细胞比例为88.89% (图1) 。HL-60细胞在诱导分化5 d后表面标志表达量:CD35为71.78%, CD71为10.97%, 活细胞比例为72.96% (图2) 。阿拉巴马大学参考方法的标准规定, 分化后活性细胞比例应≥65%, CD35表达应≥55%, CD71表达应≤20%。本实验测得的各项指标均符合阿拉巴马大学参考方法的各项质量标准, 可用作OPA实验的效应细胞。
2.2 肺炎链球菌工作菌种的鉴定
2.2.1 冻存工作种子的复活率
结果显示, 13个血清型的冻存肺炎链球菌工作菌种的复活率分别为:1型94%, 3型92%, 4型96%, 5型95%, 6A型94%, 6B型93%, 7F型91%, 9V型93%, 14型94%, 18C型94%, 19A型95%, 19F型96%, 23F型95%, 均高于90%。
2.2.2 工作菌种的抗生素抗性与敏感性检测
结果显示, 各型工作菌种均只具有其特定的抗生素抗性, 对其余3种抗生素均为敏感。见图3。
2.2.3 工作菌种的工作稀释度确定
13个血清型的冻存肺炎链球菌工作菌种的稀释倍数分别为:1型3333×, 3型6250×, 4型2000×, 5型16666×, 6A型6250×, 6B型3030×, 7F型6666×, 9V型1250×, 14型1250×, 18C型1470×, 19A型10000×, 19F型6250×, 23F型6250×, 均符合阿拉巴马大学标准中稀释倍数应≥1000的要求。每个血清型对应的稀释条件下, 存活的细菌数为80~120 cfu/spot。
2.3 补体的非特异性杀菌率
经计算, 制备的补体非特异性杀菌率:1型为7%, 3型为9%, 4型为35%, 5型为1%, 6A型为58%, 6B型为57%, 7F型为12%, 9V型为36%, 14型为35%, 18C型为1%, 19A型为5%, 19F型为4%, 23F型为47%。符合阿拉巴马大学标准中非特异性杀菌率应≤70%的质量标准。
2.4 血清样本的调理吞噬指数检测
2.4.1 杀菌曲线
5份血清样本的杀菌曲线见图4。图中可见, 各血清样本针对各型肺炎球菌的杀菌曲线均为标准的S型曲线。
2.4.2 调理指数
经菌落计数及软件Opsotiter 3的计算, 各血清样本的调理指数结果见表1。
3 讨论
OPA实验中涉及四个主要元素:效应细胞、靶菌、补体及抗体血清, 缺一不可, 对于试验的成败都非常重要。本试验中, 效应细胞选用的是HL-60细胞株 (人早幼粒白血病细胞) 。通过悬浮培养, HL-60细胞能持续增殖, 人为诱导后可以分化为成熟的中性粒细胞, 具有吞噬能力[13]。HL-60细胞在未分化和分化后表面标志物的表达情况会发生变化, 如CD71和CD35。CD71蛋白在细胞增殖中发挥重要作用, 其表达情况可以指示细胞的增殖状态;CD35是一种跨膜的补体结合蛋白, 存在于成熟的粒细胞表面, 其表达情况可以显示细胞的分化程度。HL-60细胞未分化之前, CD71的表达量较高, 细胞具有较强的增殖能力;分化后CD71的表达量降低, 细胞增殖能力减弱, CD35的表达量升高, 细胞进入分化后的成熟粒细胞状态。利用流式细胞仪对细胞表面标志物的表达情况进行监测, 可以实现对细胞分化程度的判断。HL-60细胞的活性及分化程度越高, 吞噬能力越强。
MOPA实验中的靶菌, 是带有特定抗生素抗性的各型肺炎链球菌。将靶菌按抗性不同进行分组, 每组中的4种靶菌分别携带不同的抗性。利用这一特点, 可同时对4种血清型的肺炎球菌进行功能抗体检测。制备工作菌种后, 对各型菌种的特定抗生素抗性及敏感性进行确认非常重要。此外, 为了保证试验数据的准确性, 需要确保对照孔中的活性细菌数在70~180 cfu范围之内;因此对工作菌种的冻存活力及工作稀释度的核实也必不可少。
补体在OPA实验中同样处于重要地位。补体除了与型特异性抗体协作共同参与调理吞噬作用之外, 其本身还具有一定的非特异性杀菌能力。如果补体自身的非特异性杀菌力太强, 会使特定型别的靶菌被大量杀死, 导致试验失败。因此试验中需要先对补体的非特异性杀菌率进行测定, 必要时需要对不同批次补体进行筛选。血清样本在试验前需要进行灭活补体的处理, 还需要检测是否含有抗生素, 从而排除对试验的干扰。血清样本恰当的预稀释倍数十分关键, 根据实际情况需要进行调整, 如果预稀释倍数太高, 容易导致杀菌不彻底, 影响试验结果的准确性, 而预稀释倍数太低, 则容易导致杀菌率太高, 无法检出具体的调理滴度。
本研究中, HL-60细胞检测结果显示, 分化5 d后活细胞比例为72.96%, CD35的表达量为71.78%, CD71的表达量为10.97%, 符合MOPA参考试验的标准要求。工作菌种检测结果显示, 工作菌种的冻存活力均高于90%, 抗生素抗性与敏感性与预期结果一致, 工作稀释度均≥1000, 符合标准要求。补体的检测结果显示, 非特异性杀菌率均≤70%, 符合要求。对5份血清样本的检测结果显示, 两平行样本孔间的差异<3倍, 杀菌曲线均为标准的S型曲线, 符合MOPA试验各项要求。上述结果表明, 本研究已经成功建立了MOPA检测方法。
不管是什么时候进行运动健身都需要讲究科学合理性，在春季减肥也不会例外，在正式进行锻炼之前不要忘了做好准备活动。
2.到户外去
春季最讲究护肝养肝，春季属于中医中五行里的木，而身体内的心、肝、脾、肺、肾五大器官正好对应这五行，所以肝属于木。经常外出接触大自然，感受春日暖阳的气息，可起到改善肝脏功能的作用，甚至对全身的健康来说都是有很有益的。
3.时间和天气很重要
几乎每个人都有这样的一个误区，大家都会认为在早晨进行锻炼是最好的，但是过来经过很多科学家们的研究，最后表明，最好的锻炼时间不是在早晨而是在傍晚时分，尤其是在傍晚时行户外运动最为有效。人体内的血小板在一天中的含量是有规律地变化的，下午和傍晚时分的血小板含量要比早晨的含量低20%左右，粘稠度也要比早晨时低了6%，因此，早晨最容易造成血液循环不畅，以及更易导致心脏病发，而下午时分大大降低了发病几率。
4.刚出汗就够
人们还有另外一个误区，就是认为运动时出的汗越多越好。在温度舒适的环境下进行运动，出点汗的确能作为锻炼效果的标志，但是春季的气温还并不是那么温暖舒适，还是有些偏凉的，在这种情况下如果出汗过多就要使毛孔扩张，于是空气中的凉气就会趁虚而入进到身体里，导致受凉感冒，更严重的还会引发呼吸道疾病。
5.运动结束后还要进行冷身
1.要早睡早起。
2.尽量吃些清淡的，不要吃过多的油腻食物。
3.多外出活动，呼吸一下新鲜空气。
4.多做运动，例如：仰卧起坐、跑步、俯卧撑等有利的运动。
5.多喝水，要保持水分。
6.每天适量吃一些山楂，不要食用过多。
7.少喝酒，多走路，少做车。
8.有收缩肚子的塑腰带绑在腰上。仰卧起做+呼啦圈+决明子茶.不过仰卧起坐也要技巧，不要做那种过去考试的动作，上身和床板成40度角左右的的时候停几秒，比快速地胳膊肘点到膝盖的动作有效哦 。
9.多吃蛋白类食物。
10.洗澡时，先准备一小杯温水，放入一些食盐(不要大粒的沙盐)去，比例是2：1 放入后随便搅拌一下，不要溶解掉盐，然后将水倒掉，剩下的就是湿湿的盐颗粒。分几次将放在肚子上，用手掌给肚子转圈按摩，反复多次，将全部盐用完，最后用温水清洗掉就行了。注意：按摩时由于有盐在肚子上，按摩时千万别太大力，要轻轻地！防止磨损皮肤。
11.多吃点水果和蔬菜。
12.如果你想减的快些又不反弹可以报名去个正规的健身房，找有教练资格的教练。他会根据你的生活规律帮你制定可以适合你的运动和饮食计划帮你以最快的速度减去肚子上的赘肉。
本文介绍了Waters UPLC-Xevo系统检测11种除草剂类农药残留的方法, 并详细讨论了Xevo TQ新功能在11种除草剂类农药检测方法建立中的应用。
11种除草剂类农药检测方法
材料、试剂、仪器和软件
乙腈:色谱纯;实验用水:超纯水 (18MΩ, TOC 3ppb) ;乙酸铵:优级纯;甲酸:优级纯;ACQUITY UPLC®超高效液相色谱系统;Xevo TQ质谱系统;Masslynx 4.1 SCN729数据处理系统。
实验条件
1. UPLC方法
注:DDAC在空白中含有, 0.005ppb时DDAC响应超过空白中值, 因此将此值定为检出限。
液相系统:Wa te r s AC Q U I T Y U PLC®;色谱柱:Acq uity U PLCTM B EH H I LIC 1.7m, 2.1×50 m m;P/N:1860 03460;柱温:35℃;检测周期:4min;进样量:10μL;流动相:A (250mmol NH4AC+1.4%FA H2O, pH=3.7) , B (CH3CN) ;梯度洗脱:弱洗溶剂 (乙腈/水=90/10, 900ul) , 强洗溶剂 (乙腈/水=10/90, 300μL) , 梯度方法见表1。
2. 质谱方法
M S系统:X e v o T Q;离子化模式:ESI+;毛细管电压:0.55KV;源温度:150℃;雾化气温度:450℃;雾化气流速:950L/h;锥孔气流速:10L/h;质谱检测参数见表2。
Xevo TQ新功能及使用
1 1 种除草剂的提取离子色谱图见图1。11种农药具有不同的灵敏度响应, 因此可得到其最低定量限 (LOQ=10:1信噪比) 的检测浓度各不相同, 各农药在其相应检测浓度下的PtP信噪比以及化学式等见表2。
Xevo TQ的I ntelliSta rt功能、PICS的辅助定性功能、ScanWave信号增强功能以及Quanpedia方法库, 在11种除草剂农药残留检测中具有很大的应用价值。
PICS功能扩展定性能力
在采集M R M数据时, 设定基线噪音背景的阈值, 当目标化合物响应强度超过此阈值, 即可开启此目标离子的全扫描 (M S S c a n) 、子离子扫描 (D a u g h te r S c a n) 、增强模式全扫描 (S c a nWave M S S c a n) 或增强模式子离子扫描 (Sca nWave Daughter Scan) 。在得到M RM定量色谱峰的同时得到离子确认扫描结果, 扩展定性能力。在各农药标准品的M R M图中, 得到在过峰顶点处的P I C S扫描图, 根据分析物的母离子和子离子, 很容易定性判断所对应的峰为何种农药。另外, 对于只有单个离子对的化合物, 无法进行双离子对定性时, P I C S功能在定性方面的优势就更为显著。
图2是维库溴铵515.5>356.4离子对采集的MRM PICS扫描色谱图, 在该M R M色谱图中提取了1.3 6 min时间处的P I C S质谱图 (见图3) , 将其与维库溴铵标准品PICS质谱图或M R M方法比对, 即可判断该峰为维库溴铵。
应用MassLynx 4.1中的TargetLynx软件, 可以对采集实际样品得到的PICS质谱图和标准PICS参比质谱图进行比较, 通过软件计算的正匹配和反匹配数值, 可以较为量化的判断样品和标准品中分析物的匹配度。
1 1 种农药在MRM检测中得到的PICS质谱图见图4。
ScanWave功能增强信号
Sca nWave可以根据荷质比 (m/z) , 使离子在碰撞池富集和释放, 显著提高SIR和MS扫描时的灵敏度, 在低含量分析物的扫描中具有很好的应用效果;同时在MRM检测过程中, 能够与PICS功能同时使用, 显著增强PICS M S质谱信号或子离子质谱信号。ScanWave信号增强效果见图5、图6和图7。
图5和图6是以维库溴铵 (浓度为2 0ppb) 为研究对象, 分别进行DaughterScan和ScanWaveDaughterScan的试验结果图。从得到的子离子扫描色谱图中, 可以看到ScanWaveDaughte rScan信号比DaughterScan信号增强5倍多 (见图5) ;同时, 从两种扫描方式得到的质谱图上也可以看到, ScanWave Daughter Scan的质谱信号比DaughterScan的质谱信号高出5倍 (见图6) 。
在MRM检测的同时, ScanWave与MRM检测、PICS功能同时使用, 可明显增强PICS子离子扫描的灵敏度, 提高了7倍多 (见图7) ;同时, 由于Xevo TQ超快的扫描速率, 在MRM检测中, ScanWave对MRM信号强度及MRM定量准确度都没有影响。此外, 该功能还可应用于全扫描功能中的信号增强。
Quanpedia方法库充实数据库数据量
Quanpedia是一个方法库, 从数据库中基于化合物名称或化合物类别选择感兴趣的物质, 可自动建立现成的LC方法 (包括流动相、梯度方法、色谱柱等信息) , M RM方法, 定量方法和进样序列方法;也可以实现用户已有UPLC-MS/MS方法的自行导入, 充实数据库的数据量, 用于感兴趣化合物的快速筛查。此外, 可将建立的这11种农药的UPLC-MS/MS检测方法, 导入到数据库中, 供不同UPLC-Xevo TQ系统之间传递通用。通过数据库生成的UPLC-MS/MS检测方法, 不需要标准品即可方便的进行化合物的快速筛查。目前, Waters UPLC-Xevo TQ系统现有的Quanpedia数据库已经包含910多种常见化合物的检测方法。
1.彻底清洁洗脸
男士要选择适合自己的、清洁力较强的护肤产品，彻底洗去多余的污垢、油脂。即使，外出时不妨准备一些便携式的产品，比如“吸油面纸”，彻底清洁洗脸，让脸部时刻保持干净。
2.洗脸后调理收敛毛孔
油性皮肤男士洗完脸后，皮肤将处于水分易蒸发且没有保护的状态，使用调理水(紧肤水)，缩起脸部的毛孔，让油脂不再分泌过剩。调理水可以渗透内部使肌肤饱满外，避免水分蒸发，在瞬间收敛皮脂分泌，使肌肤不易发出油光，还可以达到预防面疱的效果。
3.选择男士专用的保养品，注意补水滋润
油性皮肤男士要选择男性专用的“无油”保养品，能适度补充肌肤水分，却不增加油脂负担，有点滋润又不太湿润，成为男士选择保养品时最重要的指针。
4.使用男士面膜
油性肌肤面膜不但有助去除毛孔内的眉头粉刺，对于面疱的预防更是有效，在去除多余皮脂污垢后，让男人肌肤清爽舒适。
1、握固
将大拇指扣在手心，指尖位于无名指(第四指)的根部，然后屈曲其余四指，稍稍用力，将大拇指握牢，如攒握宝贝一般。握固可以固守精气神在体内，平时走路、坐车、闲聊、看电视时都可以握固。
2、摩肾腧
并腿坐于床沿，两手掌对搓至手心发热，分别按在后背腰部，上下按摩腰背肾腧穴，至有热感为止。可早晚各一遍，每遍约200次，可补肾纳气。
3、撞背
《黄帝内经》中有记载，肾有久病者，可以寅时面向南身放松，身体后仰，用整个背部撞击墙壁，用力适度，借撞击的反作用力使身体回复直立，如此反复进行，每次撞击30下左右，每天可以做2~3次。
4、三元式站桩
两脚分开，与肩同宽，两手由身体两侧向前合抱于腹前，位置与脐同高，两臂抱圆;同时两膝微屈，重心下沉，两膝关节微微向两旁打开。背略弓形，胸要含，背要拔，腰背部略向后拱，命门穴打开。这样前后、左右、上下都是圆，整个人显得十分圆融。这是一个补益元气的基本站桩法。常做能使肾元充沛、筋骨劲强。
5、提踵颠足
关键词：抑制素B,不育症,梗阻性无精症,非梗阻性无精症
抑制素B(Inhibin B,INHB)是一种二聚体糖蛋白激素,成年男性体内的INHB几乎全部由睾丸分泌,INHB在血清和精浆中均可检出。血清INHB反映睾丸生精上皮的功能,并被认为是精子发生的血清标志物[1,2]。本研究对195例不育男性与30例正常生育男性进行血清抑制素B水平检测,并进行分组比较,以进一步探讨抑制素B水平与睾丸精子发生的关系。
1 资料与方法
1.1 研究对象及分组
2011年1月~2012年2月到本生殖中心就诊的不育症患者195例,年龄23~38岁,平均26.5岁,所有病例排除染色体核型异常和Y染色体微缺失等情况,以两次以上精液分析结果和附睾-睾丸穿刺结果为依据,将195例不育症患者分为6组:A组(精子密度≥20×106/m L,n=35)、B组(精子密度10×106/m L~20×106/m L,n=30)、C组(精子密度1×106/m L~10×106/m L,n=30)、D组(精子密度<1×106/m L,n=30)、E组(NOA,非梗阻性无精症组,n=35)和F组(OA,梗阻性无精症组,n=35)。并设置精液常规正常的已生育男性作为对照组G组(n=30),年龄26~38岁,平均27.2岁。
1.2 标本采集
上午8∶00~10∶00抽取静脉血3~4 m L于干燥管,及时分离血清后-20℃保存备用;禁欲2~7 d,手淫法留取精液标本于洁净无毒容器。
1.3 检测方法
血清抑制素B检测采用酶联免疫吸附试验(ELISA),试剂由美国rapidbio(rb)公司提供;血清促卵泡成熟激素(FSH)、黄体生成素(LH)检测用化学发光法,试剂由美国雅培试剂有限公司提供;精子密度、活动率分析,按照世界卫生组织(WHO)分析标准进行[3],并根据精子密度和精液体积计算精子总数。
1.4 统计学方法
应用SPSS 17.0软件包进行统计学处理,计量资料数据以均数±标准差(x±s)表示,比较采用t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 各组血清INHB水平
血清INHB水平在A、B、C、D组和F组顺序降低,少精子症各组(B、C、D组)和非梗阻性无精子症组(F组)血清INHB均低于生育组(G组)。与G组比较,不育男性精子密度正常组(A组)、梗阻性无精子症组(F组)血清INHB无差异(P=0.212,0.116);与G组比较,B、C、D、E组血清INHB水平差异有统计学意义(均P<0.05);少精症各组中,B组与C组比较差异无统计学意义(P=0.398),B组与D组比较差异有统计学意义(P<0.05),C组与D组比较差异有统计学意义(P<0.05);非梗阻性无精子症组(E组)与梗阻性无精子症组(F组)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。
注:与G组比较,*P<0.05
2.2 血清INHB与精子密度、精子总数、精子活动率、血清FSH和LH的相关性
血清INHB水平与精子密度、精子总数呈显著正相关(r=0.456,P<0.01;r=0.604,P<0.01);血清INHB水平与血清FSH、LH呈显著负相关(r=-0.537,P<0.01;r=-0.413,P<0.01);血清INHB水平与精子活动率无明显相关性(r=0.164,P=0.012)。见表2。
3 讨论
抑制素(inhibin,INH)是一类糖蛋白激素,因可抑制FSH分泌而得名。男性体内INH的重要生理形式为INHB,其组装过程大部分在生精细胞内完成,然后释放到循环和精浆中。研究发现在输精管切除术后的男性精浆及睾丸切除男性血清中检测不到抑制素B,证明男性体内抑制素B来源于睾丸[4]。
本研究结果显示,血清INHB与精子密度、精子总数呈显著正相关(r=0.456,P<0.01;r=0.604,P<0.01)。血清INHB在正常对照组和梗阻性无精子症组间没有差别,少精子症各组(B、C、D组)血清INHB水平均低于正常对照组(G组),组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。无精子发生障碍组(A、G组)和梗阻性无精症组(E组)血清INHB水平高于其他各组。另外,4例由于隐睾造成的非梗阻性无精症患者血清INHB浓度均值为8.29 pg/m L,说明血清抑制素B浓度在精子发生障碍时会出现变化,并且精子发生障碍越严重血清INHB水平越低,测定血清INHB浓度可对精子发生状态作出评估,其能反映睾丸生精上皮的功能。
梗阻性无精症组和非梗阻性无精症组比较,血清INHB水平显著增高,两者比较差异有统计学意义(P<0.05),这表明在鉴别梗阻性和非梗阻性无精症方面,血清INHB有较高的特异性,与先前的研究相符[5,6,7]。血清INHB水平与精子活动率无明显相关性(r=0.164,P=0.012),表明血清INHB水平高低不能反映精子的运动能力。
男性下丘脑-垂体-性腺轴中的激素对INHB均产生影响,INHB的产生依赖于FSH,FSH是合成INHB的强烈刺激物,而INHB是对成年男性体内FSH分泌进行反馈调节的主要因素[8]。本研究中,血清INHB与FSH、LH之间存在显著负相关(r=-0.537,P<0.01;r=-0.413,P<0.01)。
总之,血清INHB水平可反映睾丸精子的发生情况,精子发生障碍者和非梗阻性无精子者低于正常男性,血清INHB水平与精子密度、精子总数呈显著正相关,与血清FSH、LH呈显著负相关。血清INHB水平可作为临床评价睾丸生精作用的重要指标。
参考文献
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